犬牙周膜干细胞膜片的制备和表征研究

摘要

目的 探讨犬牙周膜干细胞（dPDLSCs）作为种子细胞构建细胞膜片的方法。方法 拔除10月龄的雄性比格犬下前牙，分离牙周膜组织，采用组织块法提取dPDLSCs，进行体外培养和鉴定。利用维生素C诱导法构建dPDLSCs膜片，通过倒置显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜、HE染色、免疫组化染色对dPDLSCs膜片进行表征分析。结果 dPDLSCs在体外被成功分离和培养，细胞具有很强的克隆形成能力及成骨、成脂的分化潜能。细胞表面标志物CD90表达强阳性、CD34表达阴性。dPDLSCs在体外经膜片诱导液培养20 d后，可形成白色膜状的dPDLSCs膜片，膜片轻薄透明，边缘清晰整齐，具有可塑性。光镜和扫描电镜结果显示，d PDLSCs排列紧密呈复层生长，细胞膜片由多层细胞和其分泌的细胞外基质所组成，有一定的厚度且结构较致密；透射电镜结果显示，细胞内细胞器丰富，分泌功能旺盛，细胞外基质富含胶原纤维；HE染色结果显示，膜片细胞外基质丰富，细胞连接紧密；免疫组化染色结果显示，膜片中存在大量的Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和纤维连接蛋白。结论 dPDLSCs能够作为细胞膜片的种子细胞。

关键词

犬牙周膜干细胞 / 维生素C诱导法 / 细胞膜片