基于转录组测序分析PLB1调控同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞泡沫样变的分子机制

摘要

目的 基于转录组测序分析磷脂酶B1（PLB1）调控同型半胱氨酸（Hcy）诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）泡沫样变的分子机制。方法 体外培养VSMCs，分为Control组与100μmol·L^-1Hcy干预组。油红O染色观察细胞脂质沉积，检测细胞内三酰甘油及游离脂肪酸含量；真核转录组测序筛选两组细胞差异表达mRNA,GO、KEGG富集分析探索差异基因功能及参与通路；实时荧光定量PCR（q-PCR）验证脂代谢相关差异基因（PLB1、Ntrk3、Olah）的表达；STRING数据库构建PLB1蛋白互作网络，分析其与脂代谢相关蛋白（LYPLA1、PLAAT3、LCAT）的互作关系，以分子对接技术验证二者结合能力。结果 Hcy组VSMCs油红O染色阳性面积，三酰甘油及游离脂肪酸含量均升高（P<0.05）。转录组测序共筛选出42个差异表达mRNA，其中上调基因34个、下调基因8个；GO富集分析显示差异基因主要参与催化活性调控、代谢过程等生物学功能，KEGG富集分析提示其与脂代谢相关通路密切关联。q-PCR验证结果显示，Hcy组PLB1基因表达显著降低（P<0.001），而Ntrk3、Olah表达差异无统计学意义。蛋白互作分析表明，PLB1在人、鼠、酵母等多种属中均处于互作网络核心位置，且与LYPLA1、PLAAT3、LCAT存在稳定互作；分子对接显示PLB1与上述3种蛋白的结合自由能分别为-6.64、-11.8、-7.47 kcal·mol^-1，提示结合能力较强。结论 Hcy通过下调PLB1表达，影响其与LYPLA1、PLAAT3、LCAT等脂代谢相关蛋白的互作，进而破坏VSMCs脂代谢平衡，诱导细胞泡沫样变；PLB1可能是调控Hcy相关动脉粥样硬化早期病理进程的关键靶点。

关键词

转录组测序 / 同型半胱氨酸 / 血管平滑肌细胞 / 磷脂酶B1 / 表型转化