慢病毒介导的猫四连接素蛋白过表达系统的构建

杨泽昊; 胡佳艺; 赵源杰; 刘萌萌; 陈宇

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.20240155

热带生物学报 ›› 2025, Vol. 16 ›› Issue (01) : 58 -63. DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240155

慢病毒介导的猫四连接素蛋白过表达系统的构建

杨泽昊, 胡佳艺, 赵源杰, 刘萌萌, 陈宇

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摘要

四连接素（Tetranectin）是一种具有结合钙离子和肝素能力的纤溶酶原结合蛋白。通过构建稳定表达猫四连接素蛋白的细胞系，为后续探究其与猫心血管疾病的关系提供实验材料。本研究利用分子克隆技术构建过表达猫四连接素基因的重组慢病毒质粒，并通过慢病毒感染获得过表达猫四连接素蛋白的HEK293T细胞系，蛋白免疫印迹法验证蛋白表达。慢病毒质粒测序结果表明，实测猫四连接素基因CDS序列与NCBI数据库预测序列一致。经嘌呤霉素筛选过表达细胞系构建成功，猫四连接素重组蛋白以可溶形式分泌于细胞上清中，分子量约为25 kDa并带有flag标签。