三角褐指藻乳酸脱氢酶的原核表达及纯化鉴定

摘要

为了探讨三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum Bohlin）中乳酸代谢的关键酶——乳酸脱氢酶（ptLDHA）上的乙酰化修饰位点及其在乳酰化和乙酰化交互作用中的潜在作用，以三角褐指藻cDNA为模板克隆了ptLDHA基因序列，并构建了原核表达载体pMBP-C-LDHA，随后将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。经优化，在16℃、0.2 mmol·L-1 IPTG诱导24 h条件下，ptLDHA蛋白成功表达且主要为可溶性蛋白。利用His标签进行融合蛋白的纯化，并用ptLDHA多克隆抗体进行Western blot鉴定，在约78 kDa处获得单一蛋白条带，证实纯化蛋白为ptLDHA。本研究成功实现了ptLDHA在原核细胞中的表达与纯化，为后续构建乙酰化修饰位点的定点突变并探究修饰与去修饰状态对酶活性的影响奠定了基础。

关键词

三角褐指藻 / LDHA / 原核表达 / 蛋白纯化