水稻细菌性条斑病菌重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立

摘要

为便于水稻细菌性条斑病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzicola,Xoc）的早期快速检测，本研究根据GenBank公开报道的水稻细菌性条斑病菌特异性基因序列（序列号：XOCgx＿RS03090）设计了重组酶聚合酶扩增（RPA）引物、Exo荧光探针组合及nfo探针组合，并构建含有Xoc基因序列的重组质粒作为阳性对照；建立了水稻细菌性条斑病菌的重组酶聚合酶扩增法（Exo-RPA）和侧流层析试纸条检测法（LFD-RPA）的技术体系，并评估了上述两种不同终端RPA检测方法的灵敏度和特异性，通过优化反应温度、反应时间明确了其对RPA方法扩增效果的影响。结果表明，Exo-RPA和LFD-RPA检测法对水稻细菌性条斑病菌检测的灵敏度均为4.96 copies·μL^-1，反应的最佳温度均为39℃；优化后的Exo-RPA方法在12 min内检测出水稻细菌性条斑病菌，优化后的LFD-RPA可以在5 min内检测出水稻细菌性条斑病菌；与其他植物病原菌菌株一起进行检测，RPA检测方法可特异地检测出目标病原菌。该方法灵敏度高，特异性强，检测速度快，有望在水稻细菌性条斑病病原监测与病害的早期诊断上得到应用。

关键词

水稻 / 细菌性条斑病 / 重组酶聚合酶扩增 / 侧流层析试纸条 / 快速检测