橡胶树HbbZIP74基因的表达分析及蛋白原核表达纯化

摘要

为研究巴西橡胶树（Hevea brasiliensis）bZIP转录因子在天然橡胶生物合成中的作用，本研究在实验室前期工作基础上，从橡胶树中克隆了1个bZIP类转录因子HbbZIP74基因，并对其进行了生物信息学分析和表达分析，成功构建pET28-HbbZIP74原核表达载体，在大肠杆菌（Escherichia coli） BL21（DE3）菌株中进行异源表达并对重组蛋白进行纯化。结果表明，HbbZIP74基因开放读码框（ORF）为486 bp，编码161个氨基酸，含有bZIP结构域，属于bZIP类转录因子S亚家族。HbbZIP74在胶乳和叶片中表达量较高，茉莉酸、脱落酸、乙烯和水杨酸可诱导胶乳中HbbZIP74表达。HbbZIP74-His重组蛋白异源表达最佳条件为1 mmol·L^-1IPTG, 37℃诱导3 h，但主要存在于包涵体中。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化获得大小约22 kDa的重组蛋白，与预期结果一致。该研究为进一步探究HbbZIP74在天然橡胶生物合成中的功能奠定了基础。

关键词

橡胶树 / bZIP转录因子 / 基因克隆 / 基因表达 / 蛋白纯化