副溶血弧菌lux报告基因系统的建立与应用

摘要

目的：建立副溶血弧菌的lux报告基因融合实验平台，为后续研究基因转录调控机制奠定基础。方法 ：采用PCR扩增opaR的启动子区序列，并将其克隆入pBBRlux质粒中，构建重组质粒opaR-lux。将opaR-lux重组质粒分别转入野生株(WT)、opaR突变株(ΔopaR)和aphA突变株(ΔaphA)中，检测特定培养条件下三者发出的冷光值(Lux)以及在600 nm处的吸光度值(OD600)，以“Lux/OD600”表示单位OD600下的相对平均冷光单位(relative light unit, RLU)。通过比较各菌株的RLU大小，判断OpaR和AphA对opaR的调控关系，以检验实验平台的稳定性。结果：成功构建出带有opaR的p BBRlux重组质粒；在低密度(OD600<0.4)时，AphA负调控opaR的转录，当细菌达到高密度(OD600=0.8)时，AphA则对opaR的转录不起调控作用；在细菌从低密度生长到高密度(即OD600<0.8)中，OpaR对自身的转录存在负调控作用。结论 ：成功建立了副溶血弧菌的lux报告基因融合实验平台，用于后续转录调控机制的研究。

关键词

副溶血弧菌 / OpaR / AphA / lux

基金资助

南通大学临床医学专项项目(2022JZ010); 中国博士后科学基金第68批面上资助项目(2020M681513); 江苏省博士后科研资助计划项目(2020Z102)