非小细胞肺癌ALK-TKIs耐药株的构建及耐药后序贯治疗的效果探究

摘要

目的：探索间变性淋巴瘤激酶-酪氨酸激酶抑制剂（anaplastic lymphoma kinase-tyrosine kinase inhibitors,ALK-TKIs）耐药后序贯其他ALK-TKIs治疗的效果。方法：首先，收集12例序贯使用两种ALK-TKIs的非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者信息，分析克唑替尼、阿来替尼及洛拉替尼在真实世界中序贯使用的疗效。其次，构建H3122-克唑替尼耐药株（H3122-CR）、阿来替尼耐药株（H3122-AR）及洛拉替尼耐药株（H3122-LR），通过MTT及细胞克隆形成实验证明耐药株构建成功。最后，为探索ALK-TKIs耐药后序贯后代TKIs或一代、二代TKIs再挑战是否发挥抗肿瘤作用，通过MTT及克隆形成实验，在H3122-CR耐药株中使用阿来替尼和洛拉替尼，在H3122-AR耐药株中使用克唑替尼及洛拉替尼，或在H3122-LR耐药株中使用克唑替尼及阿来替尼，分别检测各代ALK-TKIs抗肿瘤细胞活性的作用。结果：真实世界中，一代ALK-TKI耐药后序贯使用二代或三代ALK-TKIs，或二代ALK-TKIs耐药后序贯使用三代ALK-TKI均可有一定临床获益。MTT实验表明，H3122细胞的克唑替尼IC₅₀值为341.7 nmol/L,H3122-CR耐药株的克唑替尼IC₅₀值为2.766μmol/L;H3122细胞的阿来替尼IC₅₀值为131.5 nmol/L,H3122-AR耐药株的阿来替尼IC₅₀值为1.07μmol/L;H3122细胞的洛拉替尼IC₅₀值为42.85 nmol/L,H3122-LR耐药株的洛拉替尼IC₅₀值为3.294μmol/L。细胞克隆形成实验提示，200 nmol/L克唑替尼、阿来替尼、洛拉替尼均不足以抑制H3122-CR、H3122-AR、H3122-LR耐药株的克隆形成能力，但完全抑制了亲本株的克隆形成能力，提示耐药株构建成功。通过MTT实验及克隆形成实验，在H3122-CR耐药株中，阿来替尼及洛拉替尼均可抑制肿瘤细胞的活性；在H3122-AR耐药株中，克唑替尼抗肿瘤细胞活性甚微，而序贯洛拉替尼可以发挥抗肿瘤作用。在H3122-LR耐药株中，克唑替尼及阿来替尼有些许抗肿瘤作用。结论：克唑替尼耐药后，序贯阿来替尼及洛拉替尼有效，阿来替尼耐药后序贯洛拉替尼有效，而重启克唑替尼并无疗效优势。洛拉替尼耐药后，克唑替尼及阿来替尼均有一定的抗肿瘤作用，为多种ALK-TKIs产生耐药性的患者提供潜在的治疗选择。

关键词

非小细胞肺癌 / 间变性淋巴瘤激酶 / 克唑替尼 / 阿来替尼 / 洛拉替尼 / 靶向治疗耐药