从自体废弃软骨组织中提取软骨细胞的方法探究

摘要

目的：探究自体废弃软骨组织中提取纯净软骨细胞的方法。方法：(1)使用原创软骨收集装置从行自体软骨细胞移植的膝关节软骨损伤患者软骨缺损区收集废弃软骨组织提取软骨细胞。(2)倒置相差显微镜下观察培养细胞形态是否符合软骨细胞形态。甲苯胺蓝染色后鉴定培养细胞是否符合软骨细胞的正常染色。免疫组织化学染色后鉴定是否为能分泌Ⅱ型胶原的软骨细胞。结果：软骨质量为72 mg，细胞浓度为1.736×10～4个/mL。原代细胞呈球形，大小均一，悬浮于培养基中，周边具有一定的折光性。培养48 h后，细胞呈多角形生长，并表现出集落生长特性，符合软骨细胞的生长特点。甲苯胺蓝染色后细胞核呈深蓝色，细胞质呈淡蓝色，轮廓清晰可见，符合软骨细胞染色特征。免疫组织化学染色后细胞核呈黄褐色，细胞基质呈棕黄色，细胞周围出现黄褐色颗粒，提示该细胞能分泌Ⅱ型胶原。结论：基于原创“刨刀-过滤网-吸引器”装置实现术中废弃软骨的高效回收，并通过阶梯酶消化法成功提取高纯度软骨细胞，为自体软骨细胞移植提供新型细胞来源，规避传统取材的医源性损伤。

关键词

软骨组织 / 软骨细胞 / 软骨缺损 / 自体软骨细胞移植技术