布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

制备布鲁氏菌LPS特异性单克隆抗体，为建立布鲁氏菌病血清学及新型免疫传感器检测方法提供有效试剂。将天然提取的布鲁氏菌LPS抗原使用长程免疫法腹腔注射BALB/c小鼠，经过5次常规免疫及1次加强免疫后，取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）融合，使用间接酶联免疫吸附试验（iELISA）对杂交瘤细胞进行筛选，并对纯化后的单克隆抗体进行生物特性鉴定。结果表明：筛选出3株稳定分泌单抗的阳性细胞株，分别命名为2-4A、3-4E、5-10B;经过亚型鉴定，3-8E、2-4A为IgG1亚型，5-10B为IgG2b亚型。将5-10B细胞株使用腹腔注射法制备腹水，并通过Protein A柱纯化腹水。纯化后单抗达到了电泳纯，BCA法测定其浓度最高可达1.431 8 mg·mL^-1, ELISA效价达到1∶512 000,间接ELISA结果显示制备的抗体具有良好的特异性。研究制备的高特异性、高活性的单克隆抗体可为后续布鲁氏菌病特异性诊断技术研究提供参考。

关键词

布鲁氏菌 / LPS / 细胞融合 / 单克隆抗体 / 生物特性鉴定

基金资助

重庆理工大学研究生创新基金项目(gzlcx20233385);; 丰都肉牛疾病诊断技术开发项目“肉牛三种重大疫病快速诊断试剂的研发”(2023Q23);; 重庆市现代农业产业技术体系创新团队项目(CQMAITS202314)