HUCMSCs荷载miR-26b治疗新生大鼠HIE的作用研究

摘要

目的 通过移植高表达miR-26b的人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE),并探讨miR-26b参与HUCMSCs治疗HIE的作用及潜在机制。方法 从新生儿脐带分离培养HUCMSCs,采用重组腺病毒技术构建、扩增miR-26b,通过腺病毒感染使HUCMSCs荷载miR-26b。利用Boyden chamber和Dunn chamber检测HUCMSCs的趋化迁移效率和速率，RTCA细胞功能分析仪检测其增殖能力，ELISA法检测其分泌功能。取新生7日龄健康SD大鼠，雌雄不限，随机分为对照组、模型组、miR-26b-HUCMSCs治疗组和Ad-HUCMSCs治疗组，每组9只。其中模型组及治疗组建立HIE模型，建模成功24 h后分别将miR-26b-HUCMSCs和Ad-HUCMSCs移植入对应治疗组大鼠损伤侧侧脑室，48 h后通过神经行为学测试(翻正反射实验)来评估HUCMSCs治疗后的短期效果，之后每组取3只大鼠脑组织，经TTC染色观察其梗死情况，其余6只大鼠继续饲养至28 d,使用神经行为功能测试(水迷宫实验)来评估长期疗效。结果 成功培养出形态为长梭形的贴壁细胞，经流式细胞术鉴定为HUCMSCs。与Ad-HUCMSCs治疗组比较，miR-26b-HUCMSCs治疗组的迁移、增殖能力明显增强，IL-6、HGF、VEGF等抗炎及组织修复因子的分泌量显著升高，IL-1分泌量减少(P<0.05),IL-2分泌量无统计学意义。移植48 h后TTC染色显示，对照组大鼠大脑未见梗死灶，模型组大鼠大脑梗死灶明显，与模型组大鼠比较，治疗组大鼠的脑梗死体积显著减少(P<0.05);与Ad-HUCMSCs治疗组比较，miR-26b-HUCMSCs治疗组脑梗死体积减少(P<0.05)。翻正反射实验和水迷宫实验结果显示，与模型组相比，Ad-HUCMSCs组和miR-26b-HUCMSCs组大鼠的翻正反射时间和到达平台时间均显著缩短(P<0.05)。结论 miR-26b能促进HUCMSCs迁移、增殖，并调节其分泌免疫调节因子；HUCMSCs能显著减少HIE大鼠的脑梗死体积，对HIE大鼠的大脑具有保护作用；高表达miR-26b可促进HUCMSCs的归巢能力，并促进分泌功能、调节免疫反应、营养神经、减轻脑损伤、发挥神经修复和保护作用。

关键词

缺氧缺血性脑病 / miR-26b / 人脐带间充质干细胞 / 细胞因子 / 脑保护