牦牛EPGN基因生物学特征及其在妊娠早期卵巢中的差异表达分析

Bioinformatics analysis of the EPGN gene and its expression profile in yak ovaries during different pregnancy stages

摘要

旨在解析牦牛EPGN基因的序列特征及其在妊娠早期的表达规律，为揭示其在牦牛繁殖活动中的生物学功能提供理论依据.以健康成年母牦牛及不同妊娠阶段的卵巢组织为材料，利用RT-PCR技术克隆EPGN基因编码区（CDS），运用生物信息学工具分析其序列特征及遗传进化，借助RT-qPCR技术检测在牦牛的心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉、下丘脑、卵巢等组织中该基因的表达模式.结果显示，牦牛EPGN基因CDS区全长为462 bp，编码153个氨基酸，系统进化树表明与牦牛亲缘关系最近的是黄牛，最远的是滑皮银汉鱼；生物信息学分析显示，EPGN蛋白为分泌型蛋白，存在信号肽序列及跨膜结构域，属于亲水蛋白，含有表皮生长因子（EGF）保守结构域及17个磷酸化位点，具有双跨膜结构域且定位于细胞膜外侧，该预测蛋白二级结构主要由无规卷曲构成；组织表达谱显示，EPGN基因在牦牛各组织中均有表达，且在卵巢中的表达量最高，显著高于其它组织（P<0.05）；此外，在妊娠早期的牦牛卵巢中，其表达量随着妊娠进程而提高.综上，研究成功获得了牦牛EPGN基因的序列特征和组织表达谱，建立了其在妊娠早期的时序表达谱，为进一步探究EPGN基因在牦牛发育及繁殖调控中的作用提供了理论依据，为提高牦牛繁殖效率提供了潜在靶点.

Abstract

This study aimed to elucidate the sequence characteristics of the EPGN gene in yak （Bos grunniens） and its expression patterns during early pregnancy， providing a theoretical foundation for understanding its biological function in yak reproductive activities. Using ovarian tissues from healthy adult female yaks at different gestational stages， the coding sequence （CDS） of the EPGN gene was cloned by RT-PCR. Bioinformatics tools were employed to analyze its sequence features and phylogenetic evolution， while RT-qPCR was used to examine the gene’s expression profiles in various tissues， including the heart， liver， spleen， lung， kidney， small intestine， muscle， hypothalamus， and ovary. The results revealed that the CDS region of the yak EPGN gene spanned 462 bp， encoding 153 amino acids. Phylogenetic analysis indicated that yaks shared the closest genetic relationship with cattle （Bos taurus） and the most distant relationship with the beaded sandsmelt （Atherion elymus）. Bioinformatics predictions suggested that the EPGN protein was a secreted hydrophilic protein， featuring a signal peptide sequence， transmembrane domains， and an epidermal growth factor （EGF） conserved domain， with 17 phosphorylation sites. The protein exhibited a dual-transmembrane structure and was localized to the outer cell membrane. Its secondary structure was predominantly composed of random coils. Tissue expression profiling demonstrated that the EPGN gene was ubiquitously expressed in all examined tissues， with the highest expression level observed in the ovary， significantly surpassing other tissues （P < 0.05）. Moreover， during early pregnancy， EPGN expression in the ovary increased with gestational progression. In conclusion， this study successfully obtained the sequence characteristics and tissue expression profile of the EPGN gene in yaks， and established its temporal expression profile during the early gestation period. These findings provided a theoretical basis for further exploring the role of the EPGN gene in the regulation of yak development and reproduction， and offered a potential target for improving yak reproductive efficiency.

Graphical abstract

关键词

牦牛 / EPGN基因 / 生物信息学分析 / 组织表达 / 妊娠

Key words

yak / EPGN gene / bioinformatics analysis / expression in tissue / pregnancy

牦牛（Bos grunniens）作为青藏高原特有的珍稀且重要的经济动物，在极端的环境中进化繁衍，因而形成了其独特的生理特征^［1］，并且具有稳定遗传性^［2］，是维系高原生态系统平衡和牧区经济发展的关键物种.我国是世界范围内牦牛存栏数最多的国家，现存栏近1 500万头^［3］.在产业经济层面，牦牛为牧民提供基础生存保障的同时，更支撑着毛皮、肉制品及乳制品等全产业链的开发，已成为青藏高原牧民的主要生活生产资料.然而，牦牛的繁育问题却严重制约着产业的进一步发展，与普通平原牛相比，牦牛卵巢体积小、初情期晚、生育率低、年均受胎率不足50%、体外受精（IVF）囊胚率仅在9.4%~19.1%之间^［4］，犊牛的成活率较低、产后同年发情困难.在当前高原生态畜牧业加速现代化、市场消费需求持续增长的背景下，提高牦牛繁殖力与犊牛成活率迫在眉睫.

表皮生长因子受体（EGFR）在细胞的生命活动中扮演着重要角色，其受7种不同生长因子的激活^［5］.Wilson K J.等人的研究报告显示，EGFR的7种不同激活配体以不同方式影响细胞信号传递^［6］，特定细胞系在细胞增殖^［7］、分化^［8-9］和运动性方面^［10］对不同表皮生长因子受体配体的反应也不同.不同表皮生长因子受体配体还能诱导不同的下游信号^{［7， 11-12］}，并与独特的体内表型相关联^［6］.在胚胎培养基中补充EGF家族生长因子会影响不同动物模型的卵母细胞生长、成熟和发育能力^［13］，包括减少细胞凋亡^［14］、增加囊胚形成^［15］，并增加不同物种滋养层细胞的增殖^［16］.EGF家族成员能够通过自分泌或旁分泌途径促进细胞增殖和分化^［17-18］，其具有的胚胎营养作用还有助于体外胚胎生产^［19］.

表皮细胞分裂原（Epigen，EPGN）作为EGF家族的新成员，由未成熟卵母细胞周围的颗粒细胞分泌^［20］，具有独特的结构和功能，尽管其与EGFR结合亲和力低，但能持续激活受体，发挥强大的促有丝分裂作用^［21］.有研究表明在小鼠卵巢组织中检测到EPGN的表达，并且与EREG关系密切，促黄体生成素（LH）可快速诱导小鼠排卵前颗粒细胞中EPGN基因表达上调，且EPGN能促进卵丘扩展，与其他EGF样配体（如AREG、EREG）在启动和调节卵丘扩展过程中发挥类似作用^［22］.目前有研究发现，在成熟培养基中添加EPGN有降低细胞凋亡、防止多精子渗透、提高猪卵母细胞体外受精发育潜能等作用^［23］.在猪卵母细胞体外成熟过程中，EPGN能降低细胞内活性氧（ROS）水平、增加谷胱甘肽（GSH）含量、改善胚胎质量^［18］. Singh B.等人的研究表明，EPGN参与MAPK级联反应，通过影响该通路调节细胞内的信号传导，在细胞增殖、分化等过程中发挥作用^［24］.在Freed D M.等人的研究结果中显示，持续的EGFR激活（如由EREG和EPGN诱导）会导致下游的Erk激活，而Erk是MAPK级联反应中的关键蛋白激酶.研究表明，EREG和EPGN能够促进MCF-7细胞分化，持续的EGFR激活与Erk激活相关，表明EPGN参与的EGFR信号通路与MAPK级联反应存在关联^［25］.目前已成功组装高质量牦牛基因组，为系统开展牦牛遗传资源保护与利用，建立全基因组选择育种技术体系提供了理论依据^［26］.

目前EPGN在人、小鼠、猪、羊等物种已有部分研究，但在卵巢方面的研究较少，在牦牛上未见相关报道.卵巢是雌性动物主要负责生产成熟卵子并分泌性激素的生殖器官^［27］，卵巢的功能性调节包括有序地启动或抑制和细胞生长与分化相关的基因^［28］.鉴于卵巢在雌性动物生殖中的核心地位，以及EPGN在其他物种生殖过程中的潜在重要作用，EPGN基因在牦牛繁殖中的作用亟待探究.本研究通过克隆牦牛EPGN基因并对其进行生物信息学分析，通过RT-qPCR获得EPGN基因在牦牛各组织及其在不同妊娠时期卵巢中的表达模式，为深入研究EPGN在雌性牦牛繁殖活动中的生物学功能提供了理论依据，有助于揭示牦牛繁殖的分子机制，对推动高原生态畜牧业现代化发展具有重要意义.

1 材料和方法

1.1 试验动物与样本采集

牦牛样本来源于四川省阿坝藏族羌族自治州红原县，遵循随机原则，选取4~5岁健康成年母牦牛宰杀，采集心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉、下丘脑、卵巢（怀孕牦牛根据胎牛大小来划分妊娠时间，采集妊娠早期不同阶段的牦牛卵巢：未妊娠、妊娠21 d、妊娠42 d、妊娠63 d），采集的样本用生理盐水冲洗后剪成0.4 cm³的组织块，迅速装入冻存管并投入液氮中保存，同时将部分卵巢置于4%多聚甲醛中固定备用.

1.2 总RNA提取

依据TRIzol试剂盒（南京Vazyme）说明书，对心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉和卵巢等组织的总RNA进行提取.检测总RNA的纯度和浓度（紫外分光光度计，日本Biospec-nano），选取OD值在1.8~2.0范围的样品用于后续试验.

1.3 cDNA 合成

上述RNA使用Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit K16225试剂盒（美国，马萨诸塞州，沃尔瑟姆，Thermo Fisher Scientific）反转成cDNA.在RNase-free离心管中加入模板RNA 1 µL，4×gDNA wiper Mix 4 µL，ddH₂O补齐至16 µL，用移液枪轻轻吹打混匀后，放置于PCR仪中，参数设定为42 ℃，2 min.随后在反应液中加入4 µL 5×HiScript Ⅱ qRT SuperMix Ⅱ并吹打均匀，放于PCR仪中反应50 ℃，15 min；85 ℃，5 s.

1.4 引物合成与基因克隆

依据NCBI数据库中牦牛EPGN预测序列（登录号：XM_005 891 251），采用Clone Manager软件设计引物，通过NCBI Primer-BLAST检测引物特异性（表1），交由擎科生物科技（北京）股份有限公司合成.

以牦牛卵巢cDNA为模板，通过RT-PCR技术扩增牦牛EPGN基因CDS区序列.在谢钰冕等人的方法基础上，扩增体系为25 µL^［29］（2×Rapid Taq Master Mix 12.5 µL，cDNA 1 µL，上游引物2 µL，下游引物2 µL，ddH₂O 7.5 µL）.反应条件为：95 ℃ 3 min（预变性），随后进行35个循环的95 ℃ 30 s（变性），62 ℃ 30 s（退火），72 ℃ 30 s（延伸），最后72 ℃ 5 min（彻底延伸），4 ℃保存.参考潘帮婷^［30］等的方法回收PCR产物，送至擎科生物进行测序.

1.5 EPGN生物信息学分析

采用多种生物信息学工具对牦牛EPGN基因及其编码的蛋白质进行系统分析.首先基于NCBI平台的ORF Finder确定EPGN基因的开放阅读框及编码区序列.通过NCBI预测其氨基酸序列，与不同物种的同源性进行比对，利用MEGA11软件进行分析生成进化树.在分析蛋白质理化性质方面采用在线软件Expasy Protparam进行检测.通过在线软件SignalP 5.0完成对其信号肽的检测.通过NetPhos-3.1预测磷酸化位点.借助NCBI的cdd数据库进行蛋白质结构域的分析.蛋白质跨膜结构域则由tmhmm在线软件进行分析，并通过WoLF PSORT预测工具进行亚细胞定位预测.为深入解析EPGN蛋白的结构特征，使用在线工具SOPMA和SWISS-MODEL对其二级结构和三级结构进行模拟预测.

1.6 牦牛EPGN基因组织表达谱

利用实时荧光定量系统（CFX96 ^TM，美国Bio-Rad），通过RT-qPCR技术检测在牦牛心、肝、脾等9个组织中EPGN基因的mRNA表达模式，为使结果更加可靠，将反转录合成的cDNA模板按同一浓度（200 ng/µL）稀释作为样品，反应体系为10 µL：5 µL 2×NovoStart® SYBR qPCR SuperMix Plus（苏州Novoprotein），0.2 µL Dye2，1 µL cDNA，0.5 µL上游引物和0.5 µL下游引物，2.8 µL无酶水，选择β-actin为内参基因.RT-qPCR扩增反应首先为95 ℃ 60 s（预变性），随后进行40个循环的95 ℃ 20 s（变性），57 ℃ 20 s（退火），72 ℃ 30 s（延伸），最后在65 ℃~95 ℃之间，每5 s增加0.5 ℃进行溶解曲线测定.引物见表1，每个样品设置3个重复.最后用2%浓度的琼脂糖凝胶电泳检测RT-qPCR结果.

1.7 EPGN基因在牦牛妊娠早期不同阶段卵巢中的表达

同样选择β-actin内参基因作为参照，选用未妊娠时期、妊娠21 d、妊娠42 d、妊娠63 d等4个时期的牦牛卵巢组织cDNA模板，经过稀释（200 ng/µL）后作为样品，采用RT-qPCR检测EPGN存在牦牛妊娠早期不同阶段卵巢中的mRNA表达模式.反应体系与扩增条件同1.5.

1.8 EPGN蛋白在牦牛妊娠早期不同阶段卵巢中的表达

选用未妊娠时期、妊娠21 d、妊娠42 d、妊娠63 d的牦牛卵巢组织，按照全蛋白提取试剂盒（北京Solarbio，BC3710）说明书提取总蛋白.使用BCA蛋白检测试剂盒（北京Solarbio，PC0020）检测蛋白的浓度与纯度.每组蛋白样品加入50 µL 5×上样缓冲液，放入100 ℃金属浴加热10 min进行变性.用10%SDS-PAGE（武汉Affinibody，SF10）分离从卵巢组织中提取的蛋白，在4 ℃下将蛋白质转移到PVDF膜上（300 mA，40 min）.用TBST冲洗PVDF膜3次，每次15 min.室温下用Y-Tec即用型封闭缓冲液（上海Yoche，No.YWB0501）在水平摇床上孵育5 min，随后与一抗（武汉Boster Biological Technology，A10011-2，1∶1 000）在4 ℃下孵育过夜.用TBST洗涤PVDF膜3次，并与二抗（北京Solarbio，SE134）37 ℃孵育1 h，以ACTB（北京Bioss，1∶2000）作为内参对照，最后使用化学发光检测系统（美国，马萨诸塞州，沃尔瑟姆，Thermo Fisher Scientific，iBright CL100）对免疫反应条带进行定量检测，分析EPGN的在妊娠早期不同阶段卵巢中的蛋白表达模式.

1.9 免疫组织化学染色

将前期固定的卵巢组织进行石蜡包埋后切片，经二甲苯脱蜡及梯度酒精水化后，采用EDTA缓冲液进行抗原热修复.PBS清洗后，使用5%BSA室温封闭30 min，一抗（武汉Boster Biological Technology，A10011-2，1∶200）孵育过夜，次日二抗室温孵育1 h，DAB显色后终止反应，苏木素复染细胞核，中性树脂封片，通过共聚焦显微镜拍照.

1.10 统计分析

本研究数据采用2^-ΔΔCt法进行归一化处理，所有试验数据使用“平均值±标准误（Mean±SEM）”表示.通过GraphPad Prism 9软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），统计显著性设定为P<0.05，所有试验均独立重复4次.

2 结果

2.1 牦牛EPGN基因克隆

以牦牛卵巢cDNA为模板，进行EPGN编码序列的扩增.采用浓度为2%的琼脂糖凝胶电泳来检测，目的条带长度为480 bp（图1A）.测序结果显示牦牛EPGN基因CDS区为462 bp，编码153个氨基酸，如图1B所示.

2.2 牦牛EPGN同源性比对与系统进化树

对包括牦牛在内的12个不同物种EPGN蛋白氨基酸序列进行同源性比对，并利用MEGA11软件构建系统进化树（图2）.在亲缘关系上牦牛（yak）与黄牛（Bos taurus）处于同一分支，黄牛与牦牛的同源性为（99.35%），其次为林麝（97.39%）、水牛（96.73%）、绵羊（96.08%）、山羊（95.42%）、小麂（94.77%）、抹香鲸（89.54%）、白鼬（88.89%）、赤狐（88.24%）、鬣狗（87.58%），与北美旱獭（85.62%）同源性最低.

2.3 生物信息学分析

2.3.1 牦牛EPGN蛋白理化性质

牦牛EPGN蛋白的分子式为C₇₇₁H₁₁₇₇N₁₉₅O₂₂₁S₁₀ ，具有153个氨基酸，相对分子质量为17 034.60 kD.理论等电点为6.57，等电点小于7，表示其是酸性蛋白质.带正电荷的氨基酸（Arg+Lys）总数为12，带负电荷的氨基酸（Asp+Glu）为13，丙氨酸含量最高（7.2%），赖氨酸和半胱氨酸最低（0%）.该蛋白的消光系数为22 390，脂肪系数为87.39，具有较高的热稳定性，不稳定指数为26.95，总平均亲水性为0.078（图3A），属于亲水性蛋白.

2.3.2 EPGN信号肽和结构域以及磷酸化位点分析

信号肽预测结果见图3B，有信号肽的概率为96.8%，绿色曲线（CS）在约20∽25位出现明显峰值，切割位点在第20∽25位氨基酸处，信号肽序列为MDFGVPISVYLLINAMTALTGEAAS，且该蛋白在50∽100位氨基酸处有表皮生长因子样蛋白结构域（图3C）.

蛋白磷酸化修饰位点的预测结果显示（图3D），EPGN有17个磷酸化位点，其中丝氨酸7个，苏氨酸6个，酪氨酸4个.

2.3.3 跨膜结构域及亚细胞定位分析

EPGN蛋白有两个跨膜结构域（图4A），有37.16个氨基酸位于跨膜区，N端在膜的内侧的概率为0.67.具体来说，在氨基酸序列10∽30位及110∽130位之间存在明显跨膜区. WoLF PSORT亚细胞定位预测工具显示，EPGN蛋白主要定位于细胞膜外侧.

2.3.4 EPGN蛋白高级结构分析

蛋白质二级结构预测结果（图4B）表明，无规则卷曲是构成该蛋白的主要二级结构成分，占比为71.24%（109个氨基酸），其余结构具体比例为α-螺旋16.34%（25个氨基酸），延伸链11.11%（17个氨基酸），β-转角1.31%（2个氨基酸）.通过SWISS-MODEL在线工具构建EPGN蛋白三级结构模型（图4C），存在多个跨膜螺旋，其二级结构特征与三级折叠模式高度一致.

2.4 EPGN基因的组织表达谱

以β-actin为内参基因作为参考，采用RT-qPCR技术检测EPGN基因在牦牛心、肝、脾等9个组织中的表达量，电泳图（图5A）及RT-qPCR（图5B）结果表明，EPGN基因在牦牛9个组织中均有表达，相对表达水平由高到低为卵巢、肌肉、心、小肠、脾、肝、肺、肾、下丘脑，这种组织特异性表达模式表明EPGN基因参与卵巢功能的调控，在雌性牦牛生殖系统中发挥着重要作用.

2.5 EPGN基因在妊娠早期卵巢的表达

为探究在牦牛妊娠早期卵巢中的EPGN表达模式，同样以β-actin为内参基因作为参考，通过RT-qPCR检测妊娠早期不同阶段卵巢中EPGN的表达量.结果表明，EPGN基因表达水平由高到低为妊娠63 d、妊娠42 d、妊娠21 d、未妊娠时期（图6B）.

2.6 EPGN蛋白在妊娠早期卵巢的表达

为验证EPGN在妊娠早期卵巢中表达的试验结果，以ACTB为内参蛋白作为参考，用Western blot检测雌性牦牛在早期妊娠不同时期卵巢中EPGN蛋白的表达.结果表明EPGN蛋白的表达随着妊娠进程的推进而升高（图7），其中在妊娠63 d时的卵巢中的表达量显著高于其它时期，与上述RT-qPCR的结果一致.

2.7 牦牛EPGN蛋白卵巢组织定位

为检测EPGN蛋白在牦牛卵巢组织中的表达定位，采用免疫组织化学染色技术，阳性信号为棕黄色，结果显示EPGN主要在颗粒细胞（GC）中表达（图8）.

3 讨论

EPGN由未成熟卵母细胞周围的颗粒细胞分泌，在雌性生殖系统的功能维持和发育中扮演着重要的角色，不仅参与细胞增殖、分化过程，还为胚胎的发育提供营养作用.现代遗传学研究已经确定了青藏高原牛和牦牛之间存在基因流动^［31-32］，最新研究显示，EPGN基因启动子区的单核苷酸多态性与卵巢储备功能下降存在显著关联，在牦牛等高原动物模型中，该基因的适应性进化特征与其低氧适应能力密切相关^［33-34］，此外，青藏高原牦牛种群的分子生态学研究表明，EPGN基因的适应性突变频率与繁殖力指标呈正相关^［35］.因此，开展EPGN基因相关研究，能够深化对雌性生殖系统调控机制与生理功能的认识，为提升牦牛繁殖性能提供重要的理论依据和科学支撑.

本研究结果显示，牦牛EPGN蛋白序列与黄牛具有高度同源性（99.35%），表明在进化过程中该基因高度保守.牦牛EPGN基因编码蛋白具有EGF类似的保守结构域，通常与细胞增殖、分化、迁移以及信号传导等过程密切相关，暗示该蛋白可能通过类似EGF的功能机制，参与细胞间的信号传递等过程，在雌性生殖系统中，可能参与调控卵巢细胞的生长、卵细胞的发育等过程.该蛋白序列中有17个磷酸化位点，多磷酸化位点表明其活性可能受激酶信号通路动态调节.Singh B.等人的研究^［24］证实，EPGN与EGFR结合时，会促使EGFR发生二聚化，激活受体的酪氨酸激酶活性，使自身磷酸化，进一步激活下游的信号通路，如Ras-MAPK和PI3K-AKT，在细胞的增殖、分化、迁移等过程中发挥关键作用.Strachan L.等人研究发现，EPGN能增加HaCaT细胞中表皮生长因子受体的磷酸化和有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）的活性^［36］，而MAPK活性对胚胎的早期发育至关重要，尤其是在压实和囊胚形成过程中^［37-38］.在牦牛繁殖过程中，例如卵泡发育和胚胎着床阶段，EPGN与其受体结合可能通过调节细胞的增殖和分化，影响卵泡的生长和胚胎的发育，如果结合异常，可能导致卵泡发育不良或胚胎着床失败，进而影响牦牛的繁殖性能.

EPGN基因的组织表达谱结果显示，其在卵巢中的表达量显著高于其他组织（P<0.05），说明EPGN基因在卵巢中具有特殊的生物学功能，可能与雌性牦牛的生殖系统密切相关.我们猜测其在卵巢中高表达，可能是为了满足卵巢正常生理功能的需求，比如促进卵母细胞成熟、维持卵泡的正常发育等.为证实EPGN对卵巢有着重要作用，我们进一步检测了EPGN基因以及其蛋白在妊娠早期不同阶段的牦牛卵巢中的表达量，结果表明其表达水平由高到低为妊娠63 d、妊娠42 d、妊娠21 d、未妊娠时期，与卵泡发育、黄体形成和胚胎着床的关键时期高度吻合.卵巢免疫组织化学染色结果显示，EPGN蛋白主要在颗粒细胞中表达，结合Strachan L.等人在小鼠研究中发现^［36］EPGN与其他EGFR配体AREG和EREG有着类似功能，能够刺激卵丘扩展，因此我们认为EPGN可能通过与相应受体结合，激活细胞内的信号通路，调节细胞的增殖、分化等过程，对卵泡发育、卵母细胞成熟产生影响，从而促进黄体细胞的发育和功能维持，进而影响牦牛繁殖.

综上所述，EPGN在牦牛的雌性生殖系统中具有至关重要的作用，其在卵巢组织中高表达，且在妊娠早期表达量不断增加，推测其可能参与卵泡发育、黄体形成和胚胎着床等过程.本研究初步揭示了EPGN的分子特征及其表达模式，可能通过EGF-like结构域和磷酸化修饰参与细胞信号调控.但EPGN蛋白的具体分泌机制及其与EGFR的相互作用尚未明确，且在牦牛妊娠早期的功能尚未解析.

4 结论

本研究克隆获得牦牛EPGN基因，生物信息学分析结果显示其序列特征在物种进化中相对保守.EPGN的组织表达和时序表达结果显示，其在卵巢中表达量最高，且在妊娠早期随着时间的增加，表达量逐渐增高.综上，推测EPGN基因在雌性牦牛的生殖系统中具有重要作用，具体作用机制有待进一步研究.

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基金资助

国家“十四五”重点研发计划专项(2023YFD1300603)

四川省衔接推进乡村振兴科技专项(2024ZHXC0003)

国家农业产业技术体系四川肉牛创新团队专项项目(SCCXTD-2024-13)

西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目资助(ZYN2024192)