JAK2调控巨噬细胞M2活化在宫颈癌微环境中的作用及机制

摘要

目的 探讨JAK2小分子抑制剂AG490对肿瘤相关巨噬细胞（TAM）衍生外泌体（Exo）治疗后宫颈癌细胞自噬、凋亡和干性特性的影响。方法 使用佛波酯（PMA）和重组人IL-4将THP-1细胞转化为M2型TAM。采用差速离心法提取Exo，通过透射电镜和纳米颗粒跟踪技术观察Exo形态和大小分布。采用Western blot检测Exo标记物蛋白表达。采用Dil联合PKH67染色检测宫颈癌细胞系HeLa细胞对TAM衍生Exo的摄取。将HeLa细胞分为3组：对照组、Exo组和Exo+AG490组，分别用TAM衍生Exo和AG490处理各组细胞；采用流式细胞术和mRFP-GFP-LC3双荧光检测细胞凋亡、自噬情况；采用Western blot检测自噬指数（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p62）、凋亡指标（Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-3）及肿瘤干细胞指数（CD133、OCT4、SOX2）的表达水平；采用肿瘤细胞颗粒形成实验检测细胞干性。结果 给予PMA和IL-4,THP-1细胞的形态发生改变，CD86的表达减少、CD206的表达增加（P <0.05）。分离的颗粒被鉴定为直径为140 nm的球形囊泡，Alix、CD63和TSG101在颗粒中有明显表达。HeLa细胞能够成功地分离和内化来自M2型TAM的Exo。与对照组比较，Exo组HeLa细胞凋亡率、GFP和mRFP荧光点、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1、Bax和caspase-3表达水平显著降低（P <0.05）,p62和Bcl-2表达水平显著增加（P <0.05），细胞球状性增加；此外，CD133、OCT4、SOX2表达显著上调（P <0.05）。AG490孵育可逆转Exo组上述指标表达趋势（P <0.05）。结论 AG490可能增强M2型TAM Exo处理的宫颈癌细胞自噬诱导的凋亡，抑制宫颈癌的致瘤特性。

关键词

宫颈癌 / Janus激酶2 / AG490 / 肿瘤相关巨噬细胞 / 外泌体 / 自噬性凋亡