E2F1对胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的影响

摘要

目的 探讨转录因子E2F1在胶质瘤细胞中的表达特征及其对替莫唑胺（TMZ）耐药性的调控作用。方法 选取胶质瘤细胞系（U87、U251、U373、A172、G267）及正常星形胶质细胞（NHA），通过Western blot检测E2F1基因表达差异；采用10μg·mL^-1 TMZ诱导构建耐药细胞株（U87/TMZ），并通过慢病毒转染技术建立E2F1敲低（shE2F1-U87/TMZ）和过表达（E2F1-OE-U87/TMZ）细胞模型。通过EdU增殖实验、划痕实验、Transwell实验评估细胞增殖、迁移及侵袭能力；Western blot检测凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bad、Bax）及上皮-间质转化（EMT）标志物（Vimentin、N-cadherin、E-cadherin）表达；免疫荧光法检测Ki-67表达水平。结果 与NHA细胞相比，胶质瘤细胞中E2F1表达显著上调（P<0.001），且耐药株U87/TMZ的E2F1表达高于非耐药U87细胞（P<0.01）；敲低E2F1后，shE2F1-U87/TMZ细胞增殖活性（EdU阳性率降低）、迁移（划痕愈合率减少49.2%）及侵袭（Transwell穿透细胞数下降62.5%）能力均被抑制，凋亡蛋白Bad、Bax表达上调（P<0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2及EMT标志物（Vimentin、N-cadherin）表达下调（P<0.01）；过表达E2F1则显著增强E2F1-OE-U87/TMZ细胞增殖（EdU阳性率增加1.8倍）、迁移（划痕愈合率提高73.6%）及侵袭能力（穿透细胞数上升2.1倍），并抑制凋亡蛋白表达（Bad、Bax降低38.5%、42.3%,P<0.01），同时促进EMT进程（E-cadherin降低56.7%,P<0.001）。结论 E2F1在胶质瘤细胞中高表达，其表达水平升高可通过抑制凋亡、激活EMT及增强转移能力，显著促进胶质瘤细胞对TMZ的耐药性，提示靶向抑制E2F1或可成为逆转TMZ耐药的潜在策略。

关键词

E2F1 / 胶质瘤 / U87 / 替莫唑胺 / 耐药 / 上皮-间质转化 / 细胞凋亡