抑制Gprc6a基因对染氟睾丸间质细胞睾酮生成功能的影响

摘要

背景 氟化物从多种途径诱导异常成骨细胞活化，促进骨钙素（osteocalcin,OCN）表达，过量氟会降低睾丸间质细胞中睾酮的产生，睾丸间质细胞中表达的骨钙素特异性受体Gprc6a与骨钙素结合能够调节睾酮的生物合成。目的 探究Gprc6a基因对NaF干预睾丸间质细胞睾酮生成的影响。方法 采用正常小鼠睾丸间质TM3细胞系和Gprc6a^-/-TM3细胞系，分为TM3组、Gprc6a^-/-TM3组、TM3 （NaF）组、Gprc6a^-/-TM3 （NaF）组、TM3 （NaF）+OCN组、Gprc6a^-/-TM3 （NaF）+OCN组，检测各组细胞活性，并在干预48 h时，以倒置荧光显微镜观察其细胞形态，荧光定量PCR检测Creb、Star、Cyp11a1和3β-HSD基因转录的表达，酶联免疫检测细胞分泌睾酮的表达。结果 MTT法检测细胞增殖活性显示Gprc6a^-/-TM3各实验组较TM3相应各组细胞活性减弱（P<0.05）,TM3 （NaF）+OCN和Gprc6a^-/-TM3 （NaF）+OCN组细胞较TM3 （NaF）组细胞活性增强；荧光显微镜下观察到Gprc6a抑制仅影响TM3细胞增殖数量，不影响细胞形态，单一NaF刺激后，Gprc6a^-/-TM3细胞更易脱壁，部分细胞回缩明显；荧光定量PCR检测基因显示，与TM3 （NaF）组相比，Gprc6a^-/-TM3 （NaF）组Creb、Star、Cyp11a1基因表达下调（P=0.032）；与TM3 （NaF）+OCN组相比，Gprc6a^-/-TM3 （NaF）+OCN组Creb、Star、Cyp11a1、3β-HSD基因表达下调（P=0.029）；与Gprc6a^-/-TM3 （NaF）组相比，Gprc6a^-/-TM3 （NaF）+OCN组Star、Cyp11a1、3β-HSD基因表达上调（P=0.012）；加入OCN干预后，原本被抑制的Gprc6a基因表达上调（P=0.010）。酶联免疫法检测细胞分泌睾酮表达结果显示，正常培养时，Gprc6a^-/-TM3组睾酮量分泌少于TM3组（P=0.004）;NaF刺激后，各组细胞睾酮分泌量减少（P=0.001）;NaF+OCN刺激，TM3组睾酮分泌量回升（P=0.003）;Gprc6a^-/-TM3细胞与同种刺激的TM3组细胞相比睾酮分泌量降低（P=0.007）。结论 抑制Gprc6a基因会促进过量氟诱导的睾丸间质细胞睾酮生成减少；Gprc6a参与过量氟-骨钙素对睾丸间质细胞生成睾酮的调控。

关键词

Gprc6a / 氟化钠 / 睾丸间质细胞 / 睾酮 / 骨钙素 / 氟中毒