肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的功能研究

摘要

背景 肿瘤相关巨噬细胞外泌体通过传递信号分子调控肿瘤细胞的生物学行为，但在喉癌的研究中鲜有报道。目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞外泌体对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 使用生物信息学方法分析头颈鳞癌与肿瘤相关巨噬细胞的关系；诱导并鉴定M0和M2型肿瘤相关巨噬细胞，采用RT-qPCR、Western blot实验对其表达的细胞表面标志物IL-10、Arginase-1 (Arg-1)、CCL-18、CD206、CD-163进行检测；提取并鉴定M0和M2型巨噬细胞分泌的外泌体(M0-exo和M2-exo)，采用透射电镜法观察外泌体特有结构，纳米颗粒追踪法测定外泌体粒径，Western blot实验检测其表达的标志性蛋白HSP70；将人喉癌细胞(AMC-HN-8)分为M0-exo组和M2-exo组，其中M0-exo组为实验组，M2-exo组为对照组。采用CCK-8实验和细胞克隆形成实验检验M0-exo和M2-exo对细胞增殖能力的影响，细胞划痕实验检验M0-exo和M2-exo对单层细胞运动能力的影响，Transwell实验检验M0-exo和M2-exo在3D环境中对细胞运动能力的影响，Western blot实验检测N-钙黏蛋白、波形蛋白、E-钙黏蛋白以验证M2-exo是否对喉癌细胞的上皮间质转化进程产生影响，进而影响细胞的迁移、侵袭能力。结果 根据生物信息学分析，发现头颈鳞癌中巨噬细胞富集情况明显；分析其中免疫细胞的组成情况，发现M2型巨噬细胞占13%；培养成功的M2型巨噬细胞表达其特有的细胞表面标志物。M2-exo符合外泌体的结构和生物学特征。与M0-exo组相比，M2-exo组AMC-HN-8细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 M2型肿瘤相关巨噬细胞外泌体可促进喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词

肿瘤相关巨噬细胞 / 外泌体 / 喉鳞状细胞癌 / 细胞迁移行为 / 细胞增殖