度洛西汀通过诱导G0/G1期细胞周期阻滞抑制神经胶质瘤生长的机制研究

摘要

背景 已有研究发现度洛西汀(duloxetine,DUL)对肺癌及胰腺癌细胞具有细胞毒性作用，但其对胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的作用及潜在机制尚不明确。目的 研究度洛西汀对GBM的抗肿瘤作用及潜在机制。方法 采用不同浓度度洛西汀(10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L)分别处理人胶质母细胞瘤细胞系U87和U251，设置空白对照组和300μmol/L替莫唑胺(temozolomide,TMZ)处理组作为对照。通过CCK-8和Transwell实验评估度洛西汀对GBM细胞增殖、迁移和侵袭的影响；流式细胞术检测细胞周期分布；结合转录组测序分析潜在机制；通过qPCR和Western blot实验检测S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)、p21和p27的mRNA和蛋白表达水平；使用Autodock Vina分子对接软件模拟度洛西汀与Skp2蛋白的结合能力。结果 度洛西汀抑制GBM细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。在U87细胞中，10μmol/L、 20μmol/L、 30μmol/L度洛西汀处理组的活性抑制率分别18.06%±3.91%、 47.37%±1.42%和64.85%±0.90%(均P<0.001)，相比对照组提高了G0/G1期细胞比例(64.76%±1.2%、 72.18%±1.22%、 79.03%±2.25%vs55.72%±0.91%，均P<0.001)。转录组测序及验证实验表明，度洛西汀可下调Skp2的mRNA和蛋白表达，同时上调p21和p27的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。分子对接结果显示度洛西汀与Skp2有较高的结合亲和力(-30.96 kJ/mol)。结论 度洛西汀能够抑制GBM细胞的增殖、迁移和侵袭，并通过调控Skp2-p21/p27信号通路诱导G0/G1期阻滞，为GBM的治疗提供了新的研究思路。

关键词

度洛西汀 / 胶质母细胞瘤 / 细胞增殖 / 细胞周期 / S期蛋白激酶相关蛋白