基于Wnt/β-Catenin信号通路探讨吴门骨密葆方含药血清促进间充质干细胞成骨分化的效应机制

摘要

目的 基于Wnt/β-连环蛋白（β-Catenin）信号通路研究吴门骨密葆方含药血清促进骨髓间充质干细胞成骨分化机制。方法 将大鼠骨髓间充质干细胞为正常血清组、经典诱导剂[间充质干细胞成骨诱导分化培养基（OBM）]组、吴门骨密葆方含药血清低（10 g生药/kg）和高剂量（20 g生药/kg）组、抑制剂[分泌型蛋白Dickkopf-1(DKK-1),0.1 ng·mL-1]组以及吴门骨密葆方含药血清低、高剂量+抑制剂组，成骨诱导分化后干预7 d时采用CCK8法检测细胞活力，随后采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色法和ALP试剂盒检测不同剂量吴门骨密葆方含药血清及加入Wnt/β-Catenin信号通路特异性阻滞剂DKK-1干预的间充质干细胞ALP染色强度和活性，Western Blot测定间充质干细胞Wnt信号蛋白家族3alpha(Wnt3a)、β-Catenin、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、破骨细胞抑制因子（osteoprotegerin,OPG）和核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）蛋白表达水平。结果 与正常组比较，吴门骨密葆方含药血清干预均可有效促进间充质干细胞增殖（P均<0.05），吴门骨密葆方含药血清可有效促进间充质干细胞ALP染色的强度和活性（P均<0.05），以及调控成骨分化相关的Wnt3a、β-Catenin、GSK3β、OPG和RANKL蛋白表达（P均<0.05），但是这些调控作用均可被DKK-1在一定程度上逆转。结论 吴门骨密葆方含药血清诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化，可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路以及影响OPG/RANKL通路而实现。

关键词

骨质疏松 / 吴门骨密葆方 / Wnt/β-catenin通路 / OPG/RANKL通路 / 成骨分化

基金资助

江苏省卫生健康委员会老年健康研究项目（LKZ2023217）; 南京中医药大学自然科学基金项目（XAR2021041）; 苏州市科技发展计划项目（SKY2022202）; 苏州市中医骨伤重点实验室建设项目（SZS2022019）; 苏州市第九批姑苏卫生重点人才项目（GSWS2022107）; 苏州市卫生青年骨干人才“全国导师制”培训项目（Qngg2022023）