IGF₂BP₁调控lncRNA NEAT1在类风湿关节炎中的作用

摘要

目的：类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种常见的全身性自身免疫疾病，可能导致关节变形和功能障碍。本研究旨在探索胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白1（insulin like growth factor 2 mRNA binding protein1,IGF₂BP₁）在RA中的表达水平，以及其对长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）核丰富转录本1（nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1）稳定性的影响和在RA发病机制中的作用。方法：通过GEO（Gene Expression Omnibus）数据库获取RA数据集，并将其分为正常对照组和RA组，使用R软件分析获取N⁶-甲基腺苷（N⁶-methyladenosine,m⁶A）相关的甲基化酶的表达量并进行差异分析。分析差异表达的m⁶A甲基化酶与lncRNA NEAT1的相关性。通过在线网站ENCORI预测与lncRNA NEAT1结合的蛋白质，并与lncRNA NEAT1表达相关的m⁶A甲基化酶取交集，从而获取关键基因。通过RNA蛋白质相互作用分析实验（RNA pull-down）验证在RA滑膜细胞中NEAT1与关键基因结合的情况。通过蛋白质印迹法验证关键基因在正常滑膜细胞和RA滑膜细胞中的表达水平。在RA滑膜细胞中转染关键基因的小干扰RNA，通过real-time RT-PCR检测NEAT1在滑膜细胞中的表达水平。结果：差异分析结果显示：与正常对照组相比，共有8个m⁶A甲基化基因在RA组中存在差异表达，其中IGF₂BP₁、甲基转移酶样蛋白14（methyltransferase 14,N⁶-adenosine-methyltransferase subunit,MEEEL14）与lncRNA NEAT1存在相关性；ENCORI预测结果显示：共有23个蛋白质能够与lncRNA NEAT1结合，与NEAT1共表达m⁶A甲基化酶取交集，获得NEAT1相关m⁶A甲基化蛋白IGF₂BP₁。蛋白质印迹法显示：与正常对照组相比，RA组中IGF₂BP₁蛋白在RA滑膜细胞中表达升高（P<0.05）;RNA pull-down结果显示IGF₂BP₁蛋白与NEAT1结合；real-time RT-PCR的结果表明：敲减IGF₂BP₁可显著降低NEAT1 m RNA表达水平（P<0.01）。结论：IGF₂BP₁可能通过稳定lncRNA NEAT1表达参与RA发病，调控IGF₂BP₁水平可能是一种新的治疗RA的方法。

关键词

类风湿关节炎 / N⁶-甲基腺苷甲基化 / 长链非编码RNA核丰富转录本1 / 胰岛素样生长因子-2mRNA结合蛋白1 / 生物信息学