曲克芦丁通过TP53抑制Erastin诱导的人正常结肠上皮细胞和结直肠癌细胞铁死亡

摘要

目的：铁死亡被证实在结直肠癌发生、发展和治疗中发挥重要作用。曲克芦丁具有多种生物学活性，但其是否与铁死亡有关还不得而知。本研究旨在探讨曲克芦丁对人正常结肠上皮细胞和结直肠癌细胞铁死亡的影响。方法：采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测曲克芦丁对铁死亡诱导剂Erastin诱导的结肠上皮细胞及结直肠癌细胞的细胞活力的影响，流式细胞仪检测曲克芦丁对细胞内脂质过氧化物、亚铁离子水平的影响，比色法检测细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)及还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)/氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione disulfide,GSSG)比值的变化，荧光染色法检测细胞线粒体膜电位。使用网络药理学和分子对接技术预测曲克芦丁参与铁死亡的潜在靶点，并采用蛋白质印迹法对其潜在靶点进行验证。结果：曲克芦丁能有效逆转由Erastin诱导的结肠上皮细胞和结直肠癌细胞铁死亡，并能显著降低由Erastin引起的细胞内脂质过氧化物、亚铁离子和MDA水平升高，提高细胞内GSH/GSSG比值、线粒体膜电位及胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达水平；网络药理学、分子对接及蛋白质印迹法检测结果显示肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)可能是曲克芦丁抑制结肠上皮细胞及结直肠癌细胞铁死亡的潜在靶点。结论：曲克芦丁通过降低TP53水平来抑制结肠上皮细胞和结直肠癌细胞的铁死亡。

关键词

曲克芦丁 / 铁死亡 / 结肠上皮细胞 / 结直肠癌细胞 / 肿瘤蛋白p53