大豆蛋白在甲状腺细针穿刺细胞蜡块制备中的应用

摘要

目的：甲状腺细针穿刺抽吸术（fine-needle aspiration,FNA）是评估甲状腺结节性质的首选方法，但传统涂片存在细胞量有限、组织结构信息丢失、难以满足后续免疫组织化学及分子检测需求等问题。细胞蜡块技术可弥补上述不足，但现有制备方法在处理微量细胞样本时存在细胞丢失率高、操作烦琐、外源污染风险高等问题。本研究旨在通过探讨大豆蛋白联合滤纸转移法制备甲状腺FNA细胞蜡块的成功率及其临床应用价值，建立一种操作简便、成本低廉、能有效富集微量细胞的细胞蜡块制备新方法，为基层医疗机构提供可行的技术方案。方法：回顾性收集2025年1月至10月于应城市人民医院超声影像科行超声引导下甲状腺FNA检查的80例患者样本，其中男性23例（28.8%），女性57例（71.2%），年龄范围为26～88岁，年龄为（53.9±11.4）岁。所有样本同时制备传统涂片和细胞蜡块。细胞蜡块采用大豆蛋白联合滤纸转移法制备：将穿刺物立即冲洗固定，离心富集细胞后，加入大豆蛋白载体液及95%乙醇，混匀后置入圆形滤纸，经离心使细胞沉淀被滤纸有效截留并完整承载于管底，随后取出沉淀进行脱水、包埋、切片。评估指标包括细胞蜡块制备成功率、苏木精-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色质量及免疫组织化学染色效果。由2位高年资病理医师采用双盲法独立完成Bethesda诊断系统诊断分类，比较传统涂片与细胞蜡块诊断分类的差异。统计学方法采用Cohen’s Kappa检验评估2种方法诊断分类的一致性，采用McNemar检验（连续性校正）比较2种方法在不确定诊断（BethesdaⅢ类+Ⅴ类）分类上的差异，计算卡方（χ²）值、P值、配对OR及其95%CI，检验水准α=0.05。结果：细胞蜡块制备成功率为96.25%（77/80）,3例失败样本涂片细胞量均低于1 000个；HE染色显示细胞形态保存完好，染色质结构清晰，细胞核-细胞质对比鲜明；大豆蛋白背景呈浅红色均匀分布，对目标细胞无遮蔽效应；偶见植物细胞碎片易于鉴别，未干扰诊断；免疫组织化学染色定位准确、背景干净，细胞角蛋白19（cytokeratin 19,CK19）、甲状腺转录因子-1（thyroid transcription factor-1,TTF-1）、甲状腺过氧化物酶（thyroid peroxidase,TPO）等抗体表达模式与对应组织蜡块一致；2种方法诊断分类的总体一致性为中等（Kappa=0.532,P<0.001），完全一致病例53例，总体符合率为66.25%（53/80）；细胞蜡块使不确定诊断（Ⅲ类+Ⅴ类）病例数由涂片的30例降至14例，不确定诊断率降低53.33%（16/30）。其中，62.50%（10/16）的涂片Ⅴ类（可疑恶性）病例在蜡块中明确升级为Ⅵ类（恶性）。McNemar检验显示差异具有统计学意义（χ²=11.250,P<0.001），配对OR=9.000（95%CI 2.160～37.480）。结论：大豆蛋白联合滤纸转移法制备甲状腺FNA细胞蜡块成功率高，能有效富集微量细胞，细胞形态与抗原性保存较好，HE染色及免疫组织化学染色效果满意。该方法可显著降低Bethesda诊断系统不确定诊断率，提升甲状腺FNA诊断明确性，为后续免疫组织化学及分子检测提供了可靠平台。

关键词

大豆蛋白 / 细胞蜡块 / 甲状腺结节 / 细针穿刺 / 细胞病理