bFGF对牙周膜成纤维细胞与骨髓间充质干细胞共育影响的体外研究

摘要

目的 探讨碱性成纤维细胞(重组人型)生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)与牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts, PDLFs)共育条件下BMSCs向PDLFs分化的影响。方法 体外培养大鼠BMSCs和PDLFs,并进行细胞鉴定。采用Millicell悬挂式细胞共育室建立BMSCs/PDLFs间接共培养模型。将实验分为5组：阴性对照组(单独BMSCs组);阳性对照组(单独PDLFs组);实验组：0 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组、1 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组和10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组。在细胞共育的第3天、第5天和第7天进行ALP活性测定。培育至2 w后，停止共育，RT-PCR法监测各组细胞的骨钙素(osteocalcin, OCN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,COLⅢ)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)和金属蛋白酶1(metalloproteinase 1,ADAMTS1)的mRNA含量。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果 ALP活性测定显示第3天、第5天和第7天共培养后，在各个时间点，各实验组与阴性对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05);各实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示阴性对照组与其余4组的OCN和OPN mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),后4组之间差异无统计学意义(P>0.05);单独BMSCs组与其余4组的COLⅢ和ADAMTS1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),其中10 ng/mLbFGF+BMSCs/PDLFs组的COLⅢ、ADAMTS1 mRNA表达量高于其余各组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 bFGF能诱导BMSCs向PDLFs分化，高浓度组(10 ng/mL)bFGF的诱导效果优于低浓度组(1 ng/mL)。

关键词

碱性成纤维细胞生长因子 / 骨髓间充质干细胞 / 牙周膜成纤维细胞 / 共培养 / 碱性磷酸酶活性