肿瘤坏死因子α上调脑血管内皮细胞RH蛋白C表达的机制

摘要

目的 研究在肝性脑病中发挥强效作用的促炎因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell, HBMEC)中RH蛋白C(rhesus glycoprotein of C,RHCG)表达的调控和潜在的作用机制。方法 HBMEC复苏，传5代，以适宜浓度铺孔板在孵箱中培养，并通过与TNF-α(浓度为0.1μg/mL内皮细胞培养基ECM)的共培养，按照作用时间不同分组，运用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)及Western Blot,检测HBMEC中RhCG mRNA及蛋白随着TNF-α作用时间延长表达量的变化，并统计变化趋势。根据以上结果选择表达量最高的时间点加PKC抑制剂Safingol处理，分组：(1)TNF-α处理0 h组；(2)TNF-α处理24 h组；(3)Safingol单独处理组；(4)TNF-α+Safingol抑制剂组：预先用Safingol处理HBMEC细胞1 h后，再予TNF-α刺激24 h。应用Western Blot方法检测HBMEC中RhCG蛋白的表达水平，并统计RhCG蛋白不同组别的变化趋势。结果 RhCG蛋白随着TNF-α作用时间的延长表达增加，24 h表达量最高。RhCG mRNA随着TNF-α作用时间的延长表达增加，24 h表达量最高。加入处理因素PKC-α特异性抑制剂Safingol后，RhCG蛋白的表达随之下降，差异有统计学意义。结论 肿瘤坏死因子TNF-α可以上调HBMEC细胞中RhCG mRNA及蛋白的表达。PKC-α参与TNF-α上调HBMEC中RhCG蛋白表达的调控。

关键词

肝性脑病 / 肿瘤坏死因子 / 人脑微血管内皮细胞 / 氨转运蛋白