携带人白细胞介素18基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定和滴度测定

毛立军; 郑骏年; 郑典宝; 郝林; 郑宏祥; 裴东生

徐州医科大学学报 ›› 2006, Vol. 0 ›› Issue (02) : 95 -97.

毛立军, 郑骏年, 郑典宝, 郝林, 郑宏祥, 裴东生

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摘要

目的构建人白细胞介素18(IL-18)基因复制缺陷型腺病毒表达载体。方法以质粒pJWIL-18为模板,设计并合成上、下游引物,利用多聚酶链反应(PCR)扩增获得IL-18基因片段,酶切后克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13 IL-18。鉴定正确后,将pCA13 IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,9～12天出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA,进行PCR鉴定。大量扩增后,氯化铯梯度离心纯化腺病毒,测病毒滴度。结果酶切分析、序列测定、PCR验证表明,IL-18基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体中。结论成功构建了表达人IL-18基因的复制缺陷性腺病毒载体。