阳离子脂质体介导小干扰RNA转染EOMA细胞时转染条件的优化

摘要

目的优化在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下将小鼠NF-κB的小干扰RNA(siRNA)转染入EOMA细胞时的转染条件。方法将1.0μl和1.5μl的LipofectamineTM2000与20 pmol、30 pmol4、0 pmol5、0 pmol6、0pmol的带荧光标记的siRNA分别组合,制备成相应的转染混合物,转染小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA细胞),于转染24 h后在荧光显微镜下计数阳性细胞率、MTT法检测各转染条件下EOMA的细胞活性。结果在siRNA量相同的情况下,分别采用1.0μl和1.5μl的LipofectamineTM2000进行转染其转染效率、细胞毒性无明显差异(P>0.05);转染混合物中siRNA浓度为50 pmol时,转染效率最高达到86%,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高并不明显;siRNA浓度为60 pmol时转染混合物表现出较高的细胞毒性。结论以1.0μl LipofectamineTM2000与50pmol的siRNA组成转染混合物可以实现对EOMA细胞高效转染并保持较高的细胞活性。

关键词

阳离子脂质体 / 小干扰RNA / 转染 / 血管内皮细胞