大鼠FasL基因克隆及重组慢病毒载体pLO134-FasL的构建

李望,孙晓青,张成静,胡书群,裴东生

徐州医科大学学报 ›› 2005, Vol. 0 ›› Issue (06) : 47 -51.

李望,孙晓青,张成静,胡书群,裴东生

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摘要

目的克隆大鼠FasL基因全长序列,构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL,为进一步研究FasL蛋白生物学功能奠定基础。方法根据大鼠FasL cDNA序列设计合成上、下游引物,以大鼠脾细胞提取的总RNA为模板,行RT-PCR扩增。扩增片断经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,插入慢病毒载体pLO134中并转化感受态细胞JM101。扩增后酶切鉴定,对正确的阳性克隆行DNA全序列分析。结果RT-PCR扩增获得870 bp DNA片段,DNA序列分析结果与发表于GenBank上的序列(U03470)完全一致。结论成功克隆大鼠FasL基因并构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL。