人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达

摘要

目的克隆人IL-10cDNA的全长序列,构建原核表达载体并诱导其表达。方法无菌条件下静脉采取正常人外周血10ml。加入等体积的生理盐水稀释后,加入淋巴细胞分离液,离心收集细胞,提取细胞总RNA。以细胞总RNA为模板,进行RT-PCR,克隆出IL-10cDNA,经双酶切后插入表达载体pMon中,用pMon-IL10重组体转染大肠杆菌DH5α。用萘啶酮酸诱导使重组人IL-10在大肠杆菌中表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳及Western-blot分析。结果人外周血单核细胞经ConA刺激后,IL-10转录水平增加,有利于IL-10cDNA的克隆;克隆的IL-10cDNA经测序证实与基因库报告的序列完全一致,插入pMon载体后经萘啶酮酸诱导能够在大肠杆菌DH5α表达;表达的蛋白质能与兔抗人IL-10特异性结合。结论人IL-10cDNA被成功克隆并能够在大肠杆菌中表达。

关键词

人 / 白细胞介素-10 / 克隆 / 表达