电穿孔法提高hTERT转染原代培养乳鼠心肌细胞效率的研究

摘要

目的探讨提高人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)转染原代培养乳鼠心肌细胞效率的有效方法。方法通过测量悬浮心肌细胞的半径,估计电击穿时临界电压的范围。以钙黄素为报告分子,确定最佳可逆性电击穿时电压范围。进而用pAdtrack-GFP-hTERT对乳鼠心肌细胞进行转染,并通过绿色荧光蛋白(GFP)的表达比较电穿孔、Lipofectamine 2000和Top Easy 3种转染方法对hTERT的转染效率。结果电压170～200 V,波宽2 ms左右,间隔125 ms,脉冲4～6个时,pAdTrack-GFP-hTERT可有效转染乳鼠心肌细胞,转染率高达7.5%,而Lipo-fectamine 2000法和Top Easy法转染率均为0(P<0.01)。结论利用电穿孔技术可将hTERT长cDNA片段导入原代培养的乳鼠心肌细胞。

关键词

电穿孔法 / 人端粒酶逆转录酶基因 / 基因转染 / 心肌细胞