PSD-95酪氨酸突变体真核表达载体的构建及其表达

摘要

目的构建突变型PSD-95的重组表达质粒(Y432F、Y439F、Y523F和Y533F,酪氨酸突变为苯丙氨酸),并在COS-7细胞中表达。方法以野生型PSD-95-pcDNA3.1为模板,采用重叠延伸PCR法获得突变型PSD-95的局部或全长cDNA片段,并克隆至PSD-95-pcDNA3.1或pcDNA3.1载体;以脂质体法将构建好的重组质粒转染COS-7细胞;通过免疫印迹法鉴定PSD-95及其突变体的表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的突变型PSD-95基因完全正确。免疫印迹显示,转染的突变型重组质粒在相对分子质量9.5×104处均有相应条带出现。结论成功构建了4个PSD-95酪氨酸残基突变体的真核表达质粒,重组质粒在COS-7细胞中高效表达。

关键词

PSD-95 / 基因突变 / 重叠延伸PCR / COS-7细胞 / 真核表达 / 载体