人OAZ突变基因的克隆构建及重组蛋白表达

摘要

目的构建人鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)突变基因,重组至原核表达载体中并表达出重组蛋白。方法采用基因定点突变技术在OAZ基因TCCTGATG(199～206)位置造成第202位碱基T碱基缺失,使核糖体的阅读框+1移位,连续表达OAZ基因的ORF2部分。测序鉴定后,重组质粒转化BL21菌,进行突变基因的蛋白表达。结果重组质粒经测序后确认202位碱基T缺失,其余碱基序列无变化。重组的突变基因转入BL21后在IPTG诱导下表达OAZ全长蛋白,SDS-PAGE分析在相对分子质量45900左右出现新的蛋白条带。结论成功构建人OAZ突变基因重组质粒,转化BL21后表达出融合的OAZ全长蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础。

关键词

鸟氨酸脱羧酶抗 / 突变 / 蛋白表达