RNAi技术沉默PTHrP基因的表达诱导软骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

摘要

目的研究甲状旁腺相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)对软骨肉瘤细胞增殖的影响。方法本实验设置空白对照组、空质粒组和siPTHrP转染组,每组样本数均为6。空白对照组不做处理;分别将空质粒pSilencer3.1H1neo(空质粒组)和重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP(siPTHrP转染组)转染至SW1353软骨肉瘤细胞株,通过MTT法检测各组细胞活力并绘制细胞生长曲线,利用流式细胞技术测定细胞凋亡率,半定量RT-PCR和Western blotting法检测PTHrP基因在mRNA水平及蛋白水平表达上的变化。结果siPTHrP转染组的细胞生长较空白对照组软骨肉瘤细胞明显缓慢;siPTHrP转染组细胞凋亡率明显升高;重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP能明显抑制软骨肉瘤细胞的PTHrP基因在mRNA转录水平和蛋白水平上的表达。结论重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP可明显抑制软骨肉瘤细胞增殖及其内源基因PTHrP在mRNA转录水平和蛋白水平的表达,为PTHrP介导的软骨肉瘤基因沉默疗法提供了理论基础。

关键词

甲状旁腺相关蛋白(PTHrP) / RNA干扰 / 基因沉默 / 软骨肉瘤 / 细胞凋亡