ADAM10抑制剂GI254023X对CCRF-CEM和Molt4细胞增殖与凋亡的作用及机制研究

摘要

目的本研究旨在探讨解聚素金属基质蛋白酶10（ADAM10）抑制剂GI254023X对急性T淋巴细胞白血病CCRF-CEM及Molt4细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法选择不同浓度的GI254023X处理CCRF-CEM及Molt4细胞,CCK-8法检测并绘制增殖抑制曲线,Annexin V/7-AAD双标记法分析细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot检测切割后的Notch1蛋白（Cleaved Notch1）,定量PCR检测抑凋亡基因Bcl-2、c-Myc、Mcl-1,促凋亡基因BAD、BAK及Notch1靶基因Hes-1的转录变化。结果 GI254023X能明显抑制CCRF-CEM及Molt4细胞增殖,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性（CCRF-CEM细胞24、48 h的相关系数r分别为0.981、0.962,Molt4细胞24、48 h的相关系数r分别为0.992、0.957）,CCRF-CEM细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为（29.40±3.28）μmol/L和（11.14±2.21）μmol/L; Molt4细胞24、48 h的IC₅₀分别为（19.04±1.58）μmol/L和（11.25±2.31）μmol/L; GI254023X能够诱导CCRF-CEM及Molt4细胞凋亡,使细胞阻滞于G₀/G₁期; Western blot检测结果显示,Cleaved Notch1在GI254023X作用后水平下降; GI254023X能够使抑凋亡基因Bcl-2、c-Myc、Mcl-1和Hes-1表达减低,促凋亡基因BAD、BAK表达升高。结论 GI254023X能抑制CCRF-CEM及Molt4细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Notch1活化有关。

关键词

GI254023X / 急性T淋巴细胞白血病 / Notch1 / 解聚素金属基质蛋白酶10