右美托咪定通过抑制P2X4R/NLRP3通路减轻七氟醚诱导的老年小鼠认知障碍

摘要

目的 评估右美托咪定对七氟醚诱导的老年小鼠认知障碍的影响，并探讨P2X4R/NLRP3通路在其中的可能作用机制。方法 将16周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型（Sev）组、右美托咪定（Dex）组和Dex+Sev组，每组16只。Sev组和Dex+Sev组分别经腹腔注射右美托咪定（20μg/kg）或生理盐水，再暴露于3.2%七氟醚6 h。将小鼠小胶质细胞系BV2细胞分为对照（Con）组、Con+OE-P2X4R组、Sev组、Dex+Sev组、Dex+Sev+OE-NC组和Dex+Sev+OE-P2X4R组。通过质粒转染构建过表达模型后，相应细胞给予0.015 mmol/L右美托咪定预处理24 h及4.1%七氟醚处理6 h。采用Morris水迷宫评估各组小鼠的认知功能。免疫荧光法检测各组小鼠海马区小胶质细胞的活化情况、神经元损伤及BV2细胞的极化状态。ELISA法检测各组海马组织和细胞培养基上清液中的炎性因子分泌。Western blot法检测各组海马组织和BV2细胞中嘌呤P2X受体（P2X4R）和NOD样受体热蛋白结构域蛋白3（NLRP3）蛋白的表达。结果 与对照组相比，Sev组小鼠的逃逸潜伏期延长，穿越原平台次数和原平台象限停留时间减少，海马区Iba1⁺细胞数和IL-6、IL-1β、TNF-α浓度升高，而NeuN⁺细胞数减少，P2X4R和NLRP3蛋白表达升高（P<0.05）。与Sev组相比，Dex+Sev组小鼠的逃逸潜伏期缩短，穿越原平台次数和原平台象限停留时间增多，海马区Iba1⁺细胞数和IL-6、IL-1β、TNF-α浓度降低，NeuN⁺细胞数增多，P2X4R和NLRP3蛋白表达降低（P<0.05）。与Sev组比较，Dex+Sev组BV2细胞中CD86的相对荧光强度减弱，培养基上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α浓度降低，CD206的相对荧光强度升高，P2X4R和NLRP3蛋白表达降低（P<0.05）。与Dex+Sev+OE-NC组相比，Dex+Sev+OE-P2X4R组BV2细胞中CD86的相对荧光强度增强，培养基上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α浓度升高，CD206的相对荧光强度下降，P2X4R和NLRP3蛋白表达升高（P<0.05）。结论 Dex可能通过抑制P2X4R/NLRP3通路，减轻七氟醚诱导的神经炎症，从而预防认知障碍的发生。

关键词

右美托咪定 / 七氟醚 / 神经炎症 / 认知障碍