转酮醇酶对结直肠癌细胞增殖及迁移侵袭的影响

摘要

目的 探讨转酮醇酶(TKT)在结直肠癌中的表达情况以及其对结直肠癌细胞增殖及迁移、侵袭能力的影响。方法 利用定量PCR技术和基于基因表达水平值的交互式分析平台分析TKT在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达情况。使用2种质粒(Ctrl质粒、TKT过表达质粒)分别转染2种结直肠癌细胞株SW480和HCT116,构建过表达TKT稳转细胞株(Ctrl组、TKT-Flag组);通过重组慢病毒技术使用2类RNA(TKT-CtrlRNA、TKT-shRNA)转染上述2种结直肠癌细胞株，构建敲减TKT稳转细胞株(NC组、shTKT组)。然后使用蛋白印迹检测过表达TKT和敲减TKT的效果，通过CCK-8、实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)、细胞克隆形成实验分析TKT对结直肠癌细胞增殖的影响。将过表达TKT的HCT116稳转细胞株对裸鼠进行皮下注射，6周后处死小鼠，解剖后取皮下肿瘤组织，通过测量肿瘤体积及质量检测TKT对结直肠癌细胞成瘤能力的影响。通过Transwell实验、划痕实验分析过表达TKT和敲减TKT对上述2种结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。向小鼠尾静脉注射过表达TKT和敲减TKT的HCT116稳转细胞，建立肺转移模型，8周后通过活体成像及H-E染色进一步检测TKT对结直肠癌细胞体内转移的影响。使用Western blot检测过表达TKT和敲减TKT对结直肠癌细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的影响。结果 与癌旁组织相比，结直肠癌组织中TKT表达显著上调，并且在结直肠癌中TKT基因表达量也增高。与Ctrl组相比，TKT-Flag组的TKT蛋白表达上调，结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力提升，EMT相关蛋白Vimentin、N-cadherin和Snail表达水平升高，E-cadherin蛋白下降；与NC组相比，shTKT组的TKT蛋白表达下调，结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力明显下降，EMT相关蛋白Vimentin、N-cadherin和Snail表达水平下降，E-cadherin蛋白升高(P<0.05)。结论 TKT在结直肠癌中高表达，并且能够增强结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的能力。

关键词

结直肠癌 / 迁移 / 侵袭 / 转酮醇酶 / 增殖 / 上皮-间充质转化