阿瑞匹坦抑制SFN蛋白对非小细胞肺癌细胞上皮间质转化机制研究

摘要

目的 研究分层蛋白Stratifin（SFN）对非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化（EMT）和迁移、侵袭的调控作用，以及阿瑞匹坦对SFN功能的影响。方法 通过瞬时转染技术将siSFN-1、siSFN-2、SFN、NC基因转入A549细胞中，Western blot实验检测SFN、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白以及波形蛋白表达水平，细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移、侵袭作用；通过CCK8实验检测阿瑞匹坦对过表达SFN的A549细胞在24、48、72 h增殖的调控能力；根据CCK8测得的药物IC₅₀值进一步探索阿瑞匹坦不同浓度（16、8、4μmol/L）作用于过表达SFN的A549细胞48 h后的SFN、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达以及细胞迁移、侵袭的变化。结果 24、48、72 h的细胞增殖-毒性实验中，随着阿瑞匹坦作用于细胞的时间不断延长，细胞增殖能力也随之出现逐渐下降趋势，药物抑制作用显著（P<0.05）。划痕实验结果表明转染SFN基因的A549细胞迁移距离明显高于NC、siSFN-1、siSFN-2组（P<0.05）。安慰剂组的迁移距离较16、8、4μmol/L阿瑞匹坦组迁移距离长；并且在16、8、4μmol/L瑞匹坦组中，细胞迁移距离随浓度降低逐渐加长（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭实验中转染SFN的A549细胞迁移和侵袭的细胞数量多于NC、siSFN-1、siSFN-2组（P<0.05）。安慰剂处理组的细胞迁移和侵袭数量较16、8、4μmol/L阿瑞匹坦组多；并且在16、8、4μmol/L瑞匹坦组中，细胞迁移和侵袭的数量随着阿瑞匹坦浓度降低逐渐增多（P<0.05）。Western blot分析显示过表达SFN促使上皮标志物E-钙黏蛋白减少，间质标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白增加（P<0.05）。安慰剂组E-钙黏蛋白较不同浓度阿瑞匹坦组减少，N-钙黏蛋白和波形蛋白较不同浓度阿瑞匹坦组明显增多；阿瑞匹坦组中随浓度增高E-钙黏蛋白增多，N-钙黏蛋白减少（P<0.05）。结论 过表达SFN能够促进非小细胞肺癌的上皮间质转化和迁移、侵袭，而阿瑞匹坦可以通过抑制SFN表达进而抑制其介导的上皮间质转化和迁移、侵袭。

关键词

SFN / 阿瑞匹坦 / 上皮间质转化 / 迁移 / 侵袭 / 调控