腺相关病毒介导脑源性神经营养因子在体外螺旋神经节细胞中的表达分析

摘要

目的 构建携带脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体，并检测其体外表达目的基因的能力。方法 利用基因重组技术，采用BamHI和EcoRI双酶分别将pcDNA3中的BDNF目的基因片断切出，再克隆到质粒pAAV-MCS中，PCR酶切测序鉴定序列。与腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、pHelper,用磷酸钙法共转染HEK 293细胞，包装得到含转基因过表达BDNF的病毒载体(rAAV-BDNF)。rAAV感染体外培养的小鼠螺旋神经节细胞(SGC)后，RT-PCR和Western blot法检测细胞BDNF基因及蛋白表达情况。结果 成功地构建BDNF基因的rAAV载体，并可在SGC中表达BDNF。结论 SGC能稳定、高效表达外源BDNF,为将其进一步应用于感音神经性耳聋性疾病治疗的研究奠定了方法学基础。

关键词

脑源性神经营养因子 / 腺相关病毒 / 基因转导 / 螺旋神经节细胞 / 感音神经性耳聋 / 基因治疗