华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析

摘要

目的 克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白(Clonorchis sinensisfatty acid binding protein,CsFABP),并对其免疫原性进行分析。方法 根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT-PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中，转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E.coli BL21中，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果 经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a(+)-CsFABP,并在E.coli BL21中高效表达。Western blot试验证实表达的CsFABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论 本研究成功构建重组质粒pET30a(+)-CsFABP,获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。

关键词

华支睾吸虫 / 脂肪酸结合蛋白 / 原核表达 / 免疫原性