人骨髓间充质干细胞分化为临床用肝样细胞的实验研究

摘要

目的 寻找临床肝细胞移植和生物型人工肝所需的肝细胞来源，研究肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)在体外分化为肝样细胞的影响。方法 利用密度梯度离心结合贴壁法分离、纯化培养hBMSCs,取P2代对数生长期的hBMSCs进行诱导，诱导前将细胞分为4组：A组加入含HGF、FGF的条件培养液；B组加入含HGF、EGF的条件培养液；C组加入含HGF、FGF、EGF的条件培养液；D组不加任何细胞因子的条件培养液。分别通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法鉴定经诱导后细胞甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的表达，观察不同诱导条件下hBMSCs分化为肝样细胞的能力。结果 A、B、C3组细胞经诱导后均可分化为形态似肝细胞样的细胞，形态无明显不同；免疫组化示A、B、C 3组细胞均在诱导后7天表达AFP,21天表达ALB,以C组阳性表达最强；RT-PCR结果显示3组细胞经诱导后表达ALB,并随着时间的延长表达增加；A、B、C 3组细胞在诱导21天时行糖原染色，均可见胞质呈红色，表明诱导后细胞有合成糖原的能力。结论 hBMSCs在体外特定的条件下可定向诱导分化为肝样细胞，尤以EGF、FGF和HGF共同诱导效果最佳。

关键词

骨髓间充质干细胞 / 肝样细胞 / 诱导分化

基金资助

江苏省高校自然科学研究重大项目(12KJA320002)