壳聚糖介导RNA干扰沉默CXCR4基因对食管癌细胞增殖、侵袭力的影响

摘要

目的 探讨沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC109细胞体外增殖、侵袭能力的影响。方法 化学合成两对针对CXCR4基因的干扰序列(实验序列、对照序列),构建表达小发夹RNA(shRNA)的质粒，以壳聚糖为基因载体转染人食管癌EC109细胞。荧光显微镜观测转染效率，Western blot法分析转染前后CXCR4蛋白的变化，集落形成实验检测细胞增殖能力，transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力，ELISA法检测转染前后EC109细胞上清液血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平的变化。结果 酶切电泳、测序证实成功构建靶向CXCR4基因的shRNA表达质粒。以壳聚糖为载体转染HEK293A,转染效率达80%以上。与空白对照组、实验对照组比较：转染实验组质粒能明显下调CXCR4蛋白表达；抑制EC109细胞增殖，影响其集落形成能力；降低EC109细胞穿膜数目，影响其侵袭能力；时间依赖性降低EC109细胞上清液中VEGF水平，转染48 h及72 h后与空白对照组、实验对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CXCR4基因在食管癌细胞生长、侵袭方面发挥重要作用，沉默其表达可降低食管癌细胞增殖，抑制肿瘤细胞集落形成和侵袭能力，抑制细胞分泌VEGF能力。CXCR4基因有可能成为食管癌治疗新的、有效靶点。

关键词

食管癌 / CXCR4基因 / RNA干扰 / 壳聚糖