大肠埃希菌MG1655 Lon蛋白酶编码基因敲除株的构建

摘要

目的 构建Lon蛋白酶编码基因缺失的大肠埃希菌(E.coli MG1655)菌株。方法 PCR扩增基因序列,该序列两端与Lon蛋白酶基因部分序列同源,中间部分为氯霉素抗性基因。电转化法将该片段转入大肠埃希菌MG1655。利用宿主菌-大肠埃希菌MG1655内pKD46编码的λ重组系统,以PCR产物中的氯霉素抗性基因替代靶基因-Lon编码基因。氯霉素抗性平板筛选阳性重组体,琼脂糖凝胶电泳和DNA测序两种方法鉴定lon敲除突变株。结果 氯霉素抗性平板成功筛选出重组菌株,基因检测结果表明Lon编码基因被氯霉素抗性基因替代。结论 本研究通过该方法成功获得了E.coli MG1655蛋白酶编码基因lon敲除突变株,为探讨大肠埃希菌Lon在牙菌斑形成中的作用奠定了基础。

关键词

Lon蛋白酶 / 基因敲除 / 大肠埃希菌 / 牙菌斑