白藜三醇对人脐静脉内皮细胞增殖及NO表达的影响

摘要

目的 观察白藜三醇对正常状态下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)及一氧化氮(NO)表达的调节作用,探讨白藜三醇对HUVECs增殖的影响及可能机制。方法 实验分组:DMEM高糖(<4.5 mg/L)培养基培养组(正常组)、白藜三醇组(分为0.2、1、5、10、20μmol/L 5个剂量亚组)、白藜三醇+LY294002组、LY294002组(阻断剂组)。其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)抑制剂。应用CCK-8法检测细胞增殖情况;Western blot检测各组细胞内蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、peNOS蛋白的表达;硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO的浓度。结果(1)白藜三醇组1、5μmol/L 2个剂量亚组与正常组相比细胞增殖增加(P<0.01),5μmol/L亚组与0.2、10、20μmol/L亚组相比细胞增殖增加(P<0.01);白藜三醇20μmol/L对细胞增殖有抑制作用(P<0.01)。(2)与对照组比较,白藜三醇组p-Akt(P<0.01)、peNOS(P<0.05)蛋白表达增加;与白藜三醇组比较,白藜三醇+LY294002组p-Akt、p-eNOS蛋白表达降低(P<0.01)。(3)与对照组比较,白藜三醇组NO表达增加(P <0.05);与白藜三醇组比较,白藜三醇+LY294002组NO表达降低(P<0.01)。结论 白藜三醇可能通过PI3-K/Akt/eNOS信号通路诱导正常状态下内皮细胞NO表达的增加,从而促进内皮细胞增殖。

关键词

白藜三醇 / 人脐静脉内皮细胞 / 一氧化氮 / 增殖