活化型及失活型n-Src真核表达载体的构建及活性鉴定

摘要

目的 构建神经型酪氨酸蛋白激酶n-Src的活化型(aSrc,SrcY535F)及失活型(iSrc,SrcK303R)真核表达载体并鉴定其在HEK293T细胞中的表达及活性。方法 以野生型pRc/CMV-n-Src真核表达载体为模板,采用PCR定点突变技术分别扩增活化型及失活型pRc/CMV-n-Src全长序列,并转染入HEK293T细胞,通过免疫印迹检测n-Src的蛋白表达及其自身磷酸化水平。结果 aSrc及iSrc目的基因成功扩增,且测序结果与预期结果一致。免疫印迹分析显示,aSrc及iSrc均能在HEK293T细胞中表达,aSrc自身磷酸化水平显著升高。结论 成功构建活化型及失活型n-Src真核表达载体,并能于HEK293T细胞中高效表达。

关键词

n-Src / 活化型 / 失活型 / 真核表达载体 / 蛋白表达