小鼠原代胸腺上皮细胞分离方法的比较与优化

摘要

目的 比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞(TEC)分离方法的效果，筛选简单、高效、实用的分离方法。方法 将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组：胶原酶Ⅰ组(CollagenaseⅠ, Col IE组，1 mg/ml)、DispaseⅡ组(DisⅡ组，3 mg/ml)、Col IE+低浓度DisⅡ组(Col IE/DisⅡ-L组，0.75 mg/ml)、Col IE+中浓度DisⅡ组(Col IE/DisⅡ-M组，1.5 mg/ml)、Col IE+高浓度DisⅡ组(Col IE/DisⅡ-H组，3 mg/ml)。优选出最适消化方法后，将所得单细胞悬液分成Percoll实验组以及Percoll对照组。采用血细胞计数板进行总细胞数计数，台盼蓝染色法观察细胞的活性；使用流式细胞术检测胸腺基质细胞(TSC)以及TEC的比例。结果 与单独使用DisⅡ与Col IE相比，Col IE与不同浓度DisⅡ联合使用均能加快胸腺组织消化(P<0.01),获取单个胸腺的总细胞数较多，尤以中、高浓度DisⅡ与Col IE联合消化效果更佳(P<0.05或P<0.01)。与单独使用酶消化组相比，Col IE与中、高浓度DisI联合消化均可不同程度地增加获取TSC和TEC的比例(P<0.01)。与Percoll对照组相比，Percoll密度梯度离心进一步提高获取TSC和TEC的比例(P<0.05)。此外，各种消化分离方法均可获得高活细胞率的细胞。结论 Col IE与DisⅡ联合消化，结合Percoll密度梯度离心可获取数量多、活性高的小鼠原代TEC。

关键词

胸腺上皮细胞 / 单细胞分离 / 胶原酶 / 中性蛋白酶 / 密度梯度离心法