突触后致密部蛋白PSD-93与SynGAP相互作用位点的鉴定

摘要

目的 鉴定突触后致密部蛋白PSD-93与SynGAP结合位点。方法 分别构建PSD-93、SynGAP质粒，免疫印迹检测各个重组质粒是否表达，免疫共沉淀检测PSD-93与SynGAP的结合情况；分别缺失突变PSD-93的95-105aa和170-190aa残基以及SynGAP的670-685aa残基，免疫印迹检测各个突变质粒是否表达，免疫共沉淀检测两者的结合情况。结果 PSD-93(1-199aa)-HA可在细胞中过表达，PSD-93(1-109aa)-HA不表达或者表达蛋白不稳定；SynGAP的3个质粒均可在细胞内过表达；PSD-93(1-199aa)均可与SynGAP的3个片段相结合。PSD-93(1-199aa)缺失突变95-105aa片段后，可在细胞内过表达，且与SynGAP的3个片段均可结合，而敲除170-190aa片段则不能与SynGAP蛋白结合；同样，突变SynGAP(670-685aa)片段则不能与PSD-93蛋白结合。结论 PSD-93与SynGAP结合的位点分别位于PSD-93的170-190aa序列以及SynGAP的670-685aa序列。

关键词

PSD-93 / SynGAP / 突触后致密部