基因1b型HCV及其不同准种核心蛋白对TRAIL诱导凋亡通路中FADD及Bid表达的影响

摘要

目的 研究基因1b型丙肝病毒(HCV)标准株C191(HCV-J6)及其不同准种病毒株：癌中心组织株(tumor tissue, T)、癌旁组织株(non-tumor tissue, NT)编码的核心蛋白(core protein, CP)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导Huh-7细胞凋亡的影响，比较凋亡通路中关键分子FADD、Bid表达水平的差异。方法 用质粒pEGFP-N1及含HCV CP基因的真核表达质粒pEGFP-N1-C191、pEGFP-N1-NT、pEGFP-N1-T瞬时转染Huh-7细胞24 h, Western blot检测CP的表达。质粒转染24 h后，100μg/L TRAIL处理细胞24 h, CCK8检测细胞增殖率；Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞术检测细胞凋亡；RT-PCR检测FADD、Bid mRNA表达水平；Western blot检测FADD、Bid蛋白表达水平。结果 HCV CP在细胞中高效表达。TRAIL诱导下各组细胞增殖率如下：T组(34.75±3.16)%、NT组(60.24±6.63)%、C191组(66.88±3.77)%、pEGFP-N1组(96.77±2.83)%,其中T、NT、C191组增殖率均低于pEGFP-N1组(P<0.05),T组低于NT、C191组(P<0.05)。T、NT、C191组细胞凋亡率均高于pEGFP-N1组(P<0.05),T组高于NT、C191组(P<0.05),NT和C191组间差异无统计学意义(P>0.05),pEGFP-N1和Huh-7组间差异无统计学意义(P>0.05)。FADD mRNA和蛋白表达水平：T组>NT、C191组>pEGFP-N1、Huh-7组(P<0.05)。Bid mRNA和蛋白表达水平：T组>NT、C191组>pEGFP-N1、Huh-7组(P<0.05)。结论 HCV CP能从mRNA和蛋白水平提高细胞FADD和Bid表达，增强TRAIL诱导Huh-7细胞的凋亡。与准种NT和HCV标准株相比，准种T编码的CP能更明显上调FADD和Bid的表达水平，显著增强Huh-7细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性。

关键词

丙型肝炎 / 不同准种 / 核心蛋白 / 细胞凋亡