长双歧杆菌抗毒素基因mazE细菌双杂交诱饵质粒的构建与鉴定

摘要

目的 构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pBT-mazE,为长双歧杆菌的压力调控机制研究奠定基础。方法 PCR扩增抗毒素蛋白MazE的编码基因，插入到带有λcI基因的载体pBT构建诱饵质粒pBT-mazE。将pBT-mazE转化至大肠杆菌报告菌株XL-1 Blue MRF′Kan,检测诱饵蛋白mazE-λcI的表达。将pBT-mazE和pTRG空载体共转化报告菌株XL-1 Blue MRF′Kan,通过3-氨基-1,2,4-三氮唑(3-amino-1,2,4-triazole, 3-AT)选择性筛选平板检测诱饵质粒的自激活作用。结果 酶切和测序结果显示MazE蛋白编码序列成功克隆入载体pBT,融合区读码框正确。诱饵质粒pBT-mazE能够表达诱饵蛋白mazE-λcI。pBT-mazE和pTRG空载体共转化的报告菌株XL-1 Blue MRF′Kan在含有3-AT的选择性筛选平板上无菌落生成，而在no 3-AT非选择性筛选平板上生长良好，表明诱饵质粒pBT-mazE在细菌双杂交系统中无自激活作用。结论 所构建的诱饵载体pBT-mazE可以用于细菌双杂交的进一步实验。

关键词

MazEF / 细菌双杂交系统 / 诱饵载体 / 长双歧杆菌