慢病毒介导E-cadherin过表达对人脂肪干细胞成表皮分化的影响

摘要

目的 探讨E-cadherin对人脂肪干细胞(hADSCs)成表皮分化的影响。方法 利用胶原酶消化法从成人脂肪组织中分离培养hADSCs。携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒载体(Lv-EGFP)介导E-cadherin基因以10、25、50和100的感染复数(MOI)作用72 h转染hADSCs,荧光显微镜下观察荧光强度并统计转染效率。Lv-EGFP-E-cadherin过表达组慢病毒和Lv-EGFP对照组慢病毒分别转染hADSCs,未转染的hADSCs为空白组；4天后RT-PCR检测E-cadheirn mRNA的表达。将各组hADSCs经成表皮诱导14天后，RT-PCR检测表皮细胞标志物CK18、ZO-1 mRNA的表达情况。结果 3代以后hADSCs呈均一长梭形，增殖活跃。MOI=10、25、50、100时，EGFP阳性率分别为51.9%±2.68%、95.1%±3.82%、95.6%±2.56%、96.9%±2.25%,选择MOI=25为最佳转染滴度进行后续实验。与对照组及空白组相比，转染Lv-EGFP-E-cadherin过表达慢病毒可显著增强hADSCs中E-cadherin mRNA的表达(P<0.05),E-cadherin过表达后可显著增高细胞中CK18、ZO-1 mRNA的表达(P<0.05),促进成表皮分化。结论 E-cadherin过表达可在一定程度上促进hADSCs向表皮细胞诱导分化。

关键词

E-cadherin / 脂肪干细胞 / 表皮分化 / 慢病毒 / 创面修复