lncRNA-ATB促进乳腺癌细胞侵袭转移及对曲妥珠单抗耐药的临床和分子机制研究

摘要

目的探讨转化生长因子-β激活的长链非编码RNA (lncRNA-ATB)促进乳腺癌细胞侵袭转移及对曲妥珠单抗耐药的分子机制。方法选取外科手术切除的15例对曲妥珠单抗耐药的乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测癌组织和癌旁组织中lncRNA-ATB的mRNA水平。对患者术后进行为期36个月的随访,采用Kaplan-Meier法绘制lncRNA-ATB的表达与患者无进展生存时间(PFS)和总生存时间(OS)曲线。选取正常乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-435S、T47D及ZR-75-30,采用RT-PCR检测lncRNA-ATB的mRNA水平。小干扰RNA(siRNA)沉默lncRNA-ATB后采用CCK8(细胞计数试剂盒-8)检测细胞对曲妥珠单抗药物敏感性的变化。采用流式细胞术检测曲妥珠单抗诱导的凋亡水平的变化。Transwell和划痕实验检测lncRNA-ATB对乳腺癌细胞侵袭转移的影响。Western blot检测lncRNA-ATB对多药耐药蛋白1(MDR1)以及上皮-间充质转化(EMT)指标(上皮钙黏蛋白和波形蛋白)的影响。结果对曲妥珠单抗耐药的乳腺癌患者的癌组织中lncRNA-ATB的mRNA水平显著高于癌旁组织(P <0.05),且lncRNA-ATB的高表达提示患者生存时间较短(P <0.05); lncRNA-ATB敲除后显著提高细胞对曲妥珠单抗的敏感性,细胞的半数最大抑制浓度(IC50)显著降低(P <0.05),且曲妥珠单抗诱导的细胞凋亡水平显著升高(P <0.05)。此外,细胞的侵袭和迁移能力显著下降。Western blot结果提示耐药蛋白MDR1的表达水平显著下降(P <0.05),并显著逆转EMT进程。结论 lncRNA-ATB在乳腺癌曲妥珠单抗耐药和侵袭转移的发展中发挥重要作用,lncRNA-ATB可能是临床乳腺癌患者预后判断的一个潜在指标和治疗靶点。

关键词

乳腺癌 / 长链非编码RNA / 曲妥珠单抗 / 耐药 / 侵袭转移