庆大霉素对CIH子代大鼠听力及内耳Connexin26蛋白表达水平影响的研究

摘要

目的 研究宫内缺氧和庆大霉素（GM）双重影响对仔鼠内耳听力损伤影响的关系。方法 建立宫内慢性缺氧（Intrauterine chronic hypoxia,CIH）孕鼠模型,24只SD孕大鼠分为正常组和缺氧组,每组12只。分娩后得正常仔鼠和缺氧仔鼠各12窝（每窝12～13只仔鼠）。仔鼠生后8周,随机选取正常仔鼠24只,分正常仔鼠组、正常+GM仔鼠组;缺氧仔鼠24只,分缺氧仔鼠组、缺氧+GM仔鼠组（各12只）。4组仔鼠做听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）检测听功能后,麻醉处死动物,取出内耳分别做Western blot、实时定量PCR、亚硫酸氢盐测序法（BSP）甲基化检测等。结果 孕鼠动脉血气分析:缺氧组孕鼠动脉血氧分压（PaO₂）、动脉血氧饱和度（SaO₂）水平和正常组比较,均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05或P <0.01）,缺氧组孕鼠与正常组间PaCO₂及pH值差异均无统计学意义（P>0.05）。ABR检测结果:缺氧+GM仔鼠组的ABR阈值明显高于其他3组,差异有统计学意义（P<0.01）。正常+GM仔鼠组、缺氧仔鼠组之间ABR阈值差异无统计学意义（P>0.05）,但正常仔鼠组ABR阈值均低于正常+GM仔鼠组、缺氧仔鼠组,差异均有统计学意义（P<0.05）。实时定量PCR检测仔鼠内耳组织GJB2 mRNA水平:缺氧+GM仔鼠组GJB2 mRNA水平明显低于其他3组,差异有统计学意义（P<0.01）。正常+GM仔鼠组、缺氧仔鼠组之间的GJB2 mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05）,但正常仔鼠组的GJB2 mRNA水平均高于正常+GM仔鼠组、缺氧仔鼠组,差异均有统计学意义（P <0.05）。Western blot检测仔鼠内耳Connexin26蛋白表达的结果和GJB2 mRNA表达水平一致。甲基化测序:GJB2基因启动子岛1、岛2区域甲基化分析,缺氧+GM仔鼠组内耳组织中的GJB2基因启动子区域岛1、岛2位点甲基化率百分比明显高于其他3组,差异有统计学意义（P <0.01）。正常+GM仔鼠组和缺氧仔鼠组的GJB2基因启动子区域岛1、岛2位点甲基化率百分比水平差异无统计学意义（P>0.05）,但和正常仔鼠组比较明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 妊娠期缺氧及GM可导致仔鼠听力损伤,并且有协同效应。主要是致聋基因GJB2基因启动子岛1、岛2区域甲基化水平上升,GJB2 mRNA水平下降,Connexin26蛋白表达下降。

关键词

慢性间歇性缺氧 / 庆大霉素 / 内耳 / Connexin26蛋白 / 听力 / 大鼠