肝细胞生长因子真核表达质粒的构建、鉴定及表达

摘要

目的 克隆人肝细胞生长因子（human hepatocyte growth factor,hHGF）的编码基因,构建真核表达载体,获得hHGF蛋白。方法 从含hHGF的人肝脏组织总RNA中,利用RT-PCR方法扩增出hHGF cDNA;利用TA克隆技术,将该基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1⁺质粒,转化E.coli DH5α细胞,鉴定pcDNA3.1⁺-hHGF重组质粒。将重组质粒pcDNA3.1⁺-hHGF转染293T细胞,应用ELISA方法检测hHGF在293T细胞中的表达。结果（1）测序结果证实本实验克隆的基因与人HGF基因序列一致。（2）重组质粒pcDNA3.1⁺-hHCF是具有表达功能的真核表达质粒。（3）pcDNA3.1⁺-hHGF转染293T细胞,于转染后12、24、48、72 h均能检测到hHGF表达。结论 成功构建hHGF真核表达载体,获得分泌性hHGF蛋白。

关键词

人肝细胞生长因子 / TA克隆 / 亚克隆 / 真核表达载体